[发明专利]一种工程菌及制备（3R,5R）6-氰基-3,5-二羟基己酸叔丁酯的方法有效
| 申请号： | 201410314478.1 | 申请日： | 2014-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN104087547A | 公开（公告）日： | 2014-10-08 |
| 发明（设计）人： | 吴坚平;陈少云;何秀娟;杨立荣;徐刚 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 工程 制备 氰基 羟基 己酸 叔丁酯 方法 | ||
1.一种工程菌，包括宿主细胞和转入宿主细胞的目的基因，其特征在于，所述目的基因为卤代醇脱卤酶基因。
2.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述卤代醇脱卤酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.3所示。
3.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)。
4.如权利要求1所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌含有表达载体pET-30a(+)，所述卤代醇脱卤酶基因连接在表达载体pET-30a(+)上。
5.一种利用权利要求1～4所述的工程菌制备(3R，5R)6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯的方法，包括：
(1)培养工程菌并诱导卤代醇脱卤酶基因表达，离心取细胞，用缓冲液重悬，获得静息细胞悬液；
(2)往静息细胞悬液中添加(3R，5S)6-氯-3，5-二羟基己酸叔丁酯和NaCN进行反应，反应完成后，从反应液中分离纯化得到(3R，5R)6-氰基-3，5-二羟基己酸叔丁酯。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养工程菌的培养基液配方为：蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，NaCl10g/L，pH为7.0。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述培养工程菌的温度为35～40℃，转速为180～220rpm。
8.如权利要求5所述的方法，其特征在于，诱导卤代醇脱卤酶基因表达的方法为：至培养液的OD600达到0.8～1.2，加入0.4～0.8mM IPTG，16～22℃温度下诱导20小时。
9.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反应的温度为25～35℃，pH为7.0～9.0。
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