[发明专利]一种催化生产1;5-戊二胺的工程菌及其应用

权利要求书

1.一种工程菌，是在大肠杆菌B株或其衍生菌株中过表达赖氨酸脱羧酶基因，同时表达赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白基因cadB；

所述赖氨酸脱羧酶基因为cadA；

所述在大肠杆菌B株或其衍生菌株中过表达赖氨酸脱羧酶基因，同时表达赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白基因cadB的方法为如下(1)或(2)所示：

(1)将含有赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因和包含RBS22的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白编码基因的片段导入所述大肠杆菌B株或其衍生菌株中；

所述片段是通过重组表达载体导入的；

所述重组表达载体是将所述片段插入pET28a(+)的多克隆位点间得到的；

所述重组表达载体构建过程如下：将含有赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因的片段插入pET28a(+)的Nco I和Sal I酶切位点间，得到重组表达载体1；再将包含RBS22的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白编码基因的片段插入重组表达载体1的Not I和Hind III位点间得到；

所述赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.14所示；

所述RBS22的核苷酸序列如SEQ ID No.12中自5’末端起第7255位至第7263位核苷酸所示；

(2)将所述大肠杆菌B株或其衍生菌株的cadBA操纵子的启动子替换为适用于大肠杆菌的能解除cadB转录阻遏的启动子，再将含有赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因的片段导入所述大肠杆菌B株及其衍生菌株中；

所述将大肠杆菌B株或其衍生菌株的cadBA操纵子的启动子替换为T7启动子的过程如下：将带有T7启动子序列的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白的编码基因的质粒导入所述大肠杆菌B株或其衍生菌株中进行同源重组得到；

所述带有T7启动子序列的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白的编码基因的质粒是将带有T7启动子序列的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白的编码基因插入pKOV质粒的BamHI和Not I位点间得到；

所述带有T7启动子序列的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.21所示；

所述含有赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因的片段是通过重组表达载体导入的；

所述重组表达载体是将所述片段插入pET28a(+)的多克隆位点间得到的；

所述重组表达载体构建过程如下：将含有赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因的片段插入pET28a(+)的Nco I和Sal I酶切位点间；

所述赖氨酸脱羧酶蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.13所示；

所述含有赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因的片段如SEQ ID No.3所示。

2.根据权利要求1所述的工程菌，其特征在于：所述赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.12中自5’末端起第7269位至第8603位核苷酸所示；

所述包含RBS22的赖氨酸-戊二胺逆向转运蛋白编码基因的片段如SEQ ID No.11所示；

所述赖氨酸脱羧酶蛋白的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.12中自5’末端起第5071位至第7215位核苷酸所示。

3.根据权利要求1或2所述的工程菌，其特征在于：所述大肠杆菌B株为E.coli BL21(DE3)。