[发明专利]一种利用花生粕二步固态发酵生产益生肽的方法

权利要求书

1.一种利用花生粕二步固态发酵生产益生肽的方法，步骤如下：

以花生粕为原料，按料水重量比1:0.8-1:1.1与自来水混合均匀后115-121℃灭菌10-20min，灭菌后按花生粕重量的2%（v/w）接入黑曲霉孢子液，混合均匀后在28℃~32℃下培养24~28h，每4h翻料一次；培养完毕后将3批次混合，按花生粕重量接入10%（v/w）戊糖片球菌，混合均匀后在37℃~46℃下厌氧发酵36~42h，发酵结束后60℃干燥、粉碎，制得益生肽。

2.根据权利要求1所述的利用花生粕二步固态发酵生产益生肽的方法，其特征在于，所述的黑曲霉为高产酸性蛋白酶的黑曲霉，保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，其保藏编号为CGMCC9183。

3.根据权利要求1所述的利用花生粕二步固态发酵生产益生肽的方法，其特征在于，所述的戊糖片球为耐高温、快速产乳酸的戊糖片球菌，保藏至中国普通微生物菌种保藏管理中心，其的保藏编号为CGMCC9182。

4.根据权利要求3所述的利用花生粕二步固态发酵生产益生肽的方法，其特征在于，所述的戊糖片球菌的培养步骤为：

戊糖片球菌经活化斜面接入MRS培养基37℃培养36h，而后以5%接种量进行逐级扩培12h，直至足够的固态发酵用量；

MRS培养基（g·L-1）：葡萄糖20，牛肉膏10，胰蛋白胨10，酵母膏5，K₂HPO₄ 2，柠檬酸三铵2，乙酸钠5，MgSO₄ 0.1，MnSO₄·H₂O 0.05，吐温-80 1，pH自然，121 ℃灭菌20 min。

5.根据权利要求2所述的利用花生粕二步固态发酵生产益生肽的方法，其特征在于，所述的黑曲霉的培养步骤为：

黑曲霉经活化斜面后，划线马铃薯培养基平板30℃培养5d，用无菌水冲洗平板，制成孢子悬浮液；

马铃薯培养基：马铃薯 20g，蔗糖 2g，自来水 100mL，琼脂 2g ，pH 自然（约6.0） 121℃灭20min；

马铃薯处理方法： 马铃薯去皮，切成块加水，煮沸30min，用纱布过滤，滤液加糖，补足水至100ml，装入三角瓶。

6.如权利要求1-5任一项所述的方法制备的益生肽。

7.如权利要求1-5任一项所述的方法制备的益生肽，多肽含量达到25%以上，乳酸含量达到8.0%以上，乳酸菌活菌数达到10⁹ CFU/g以上，酸性蛋白酶达到200U/g以上。

8.如权利要求6或7所述的益生肽在制备饲料中的应用。