[发明专利]一种聚3‑羟基丙酸共聚物及其生产方法

权利要求书

1.一种聚3-羟基丙酸共聚物，其特征在于，结构式如下所示：

2.一种产权利要求1所述共聚物的基因工程菌，其特征在于，在宿主菌基因组上整合甘油脱水酶基因和甘油脱水酶再激活酶基因，并导入聚羟基脂肪酸合成酶基因、丙醛脱氢酶基因、β-酮脂酰辅酶A硫解酶基因、乙酰乙酰辅酶A还原酶基因和丙酰辅酶A合成酶基因，重组后的基因工程菌具有生物合成聚3-羟基丙酸-co-3-羟基戊酸的能力。

3.权利要求2所述基因工程菌，其特征在于，所述宿主菌为大肠杆菌。

4.权利要求2所述基因工程菌，其特征在于，所述甘油脱水酶基因来源于Klebsiella pneumoniae的dhaB基因；甘油脱水酶再激活酶基因为来源于Klebsiella pneumoniae的gdrAB基因；聚羟基脂肪酸合成酶基因来源于Ralstonia eutrophaH16的phaC1基因；丙醛脱氢酶基因来源于Salmonella typhimurium的pduP基因；β-酮脂酰辅酶A硫解酶基因来源于Ralstonia eutrophaH16的bktB基因；乙酰乙酰辅酶A还原酶基因来源于Ralstonia eutrophaH16的phaB1基因；丙酰辅酶A合成酶基因来源于Chloroflexiaurantiacus的pcs’基因。

5.一种产权利要求1所述共聚物基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：

1)宿主菌基因的整合：将甘油脱水酶基因dhaB和甘油脱水酶再激活酶基因gdrAB整合到宿主菌基因组上，获得基因整合宿主菌；

2)重组质粒的构建：分别构建含有丙醛脱氢酶基因pduP、聚羟基脂肪酸合成酶基因phaC1重组质粒和含有β-酮脂酰辅酶A硫解酶基因bktB、乙酰乙酰辅酶A还原酶基因phaB1、丙酰辅酶A合成酶基因pcs’的重组质粒；

3)基因工程菌的构建：将步骤2)所得的两个重组质粒导入步骤1)所得的基因整合宿主菌，获得基因工程菌。

6.权利要求5所述方法，其特征在于，步骤1)所述宿主菌基因的整合，是通过搭桥PCR得到目的片段gdrAB-dhaB片段，以自杀质粒pRE112为媒介与大肠杆菌进行同源重组将gdrAB-dhaB整合到大肠杆菌基因组中得到基因整合宿主菌；步骤2)所述重组质粒的构建，是通过克隆丙醛脱氢酶基因pduP和聚羟基脂肪酸合成酶基因phaC1，通过搭桥PCR得到目的基因片段phaC1-pduP，再将目的基因片段和质粒pET21a进行双酶切并酶连后得到重组质粒pET21a-phaC1-pduP；通过克隆β-酮脂酰辅酶A硫解酶基因bktB，同时克隆乙酰乙酰辅酶A还原酶基因phaB1和丙酰辅酶A合成酶基因pcs’，通过搭桥PCR得到目的基因片段bktB-phaB1-pcs’，将目的基因片段和质粒pBAD18进行双酶切并酶连后得到重组质粒pBAD18-bktB-phaB1-pcs’；步骤3)所述基因工程菌的构建，是将重组质粒pET21a-phaC1-pduP和重组质粒pBAD18-bktB-phaB1-pcs’导入到基因整合宿主菌中，获得重组大肠杆菌。

7.权利要求5或6所述方法，其特征在于，所述甘油脱水酶基因来源于Klebsiella pneumoniae 的dhaB基因；甘油脱水酶再激活酶基因为来源于Klebsiella pneumoniae的gdrAB基因；聚羟基脂肪酸合成酶基因来源于Ralstonia eutrophaH16的phaC1基因；丙醛脱氢酶基因来源于Salmonella typhimurium的pduP基因；β-酮脂酰辅酶A硫解酶基因来源于Ralstonia eutrophaH16的bktB基因；乙酰乙酰辅酶A还原酶基因来源于Ralstonia eutrophaH16的phaB1基因；丙酰辅酶A合成酶基因来源于Chloroflexiaurantiacus的pcs’基因。