[发明专利]一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸B和迷迭香酸的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物分离领域，涉及一种分离纯化丹酚酸B和迷迭香酸的方法，尤其涉及一种利用高速逆流色谱分离纯化高纯度丹酚酸B和迷迭香酸的方法。

背景技术

丹参为唇形科植物Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根，具有活血通经、祛瘀止痛、清心除烦的药效。丹参的化学成分主要为水溶性的丹酚酸类与脂溶性的丹参酮类。丹酚酸B具有强烈的抗氧化和清除氧自由基的活性。迷迭香酸是一种天然抗氧化剂，具有抗炎抗氧化等活性。

丹酚酸B分子结构式如下：

迷迭香酸分子结构式如下：

现有技术一般采用普通色谱柱法、重结晶等传统的分离方法分离植物中的有效单体，不仅费时费力、污染环境，且所有固定相对样品有不可逆性吸附作用。高速逆流色谱(HSCCC)是近年来发展起来的一种连续的无需固体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已经广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明内容

本发明的目的是提供一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸B和迷迭香酸的方法，该方法能够从丹参药材药材中提取纯的丹酚酸B和迷迭香酸。

本发明通过以下技术方案实现：

一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸B和迷迭香酸的方法，由粗提物的制备和粗提物的分离纯化两部分组成，其特征在于粗提物的分离纯化应用高速逆流色谱来进行，具体的，所述方法包括以下步骤：

(1)将丹参药材粉碎成粗粉，加入体积分数10％-95％的乙醇溶剂中，加热至回流提取数次，提取液趁热过滤，冷却，滤液减压除去溶剂，得到乙醇提取物；

(2)丹酚酸B、迷迭香酸的富集：将乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中，用水和甲醇或乙醇的混合溶剂梯度洗脱，收集含有丹酚酸B、迷迭香酸的洗脱液，减压回收乙醇，干燥、得到丹酚酸B、迷迭香酸混合粗提物；

水和甲醇或乙醇的混合溶剂指的是水和甲醇的混合溶剂或者水和乙醇的混合溶剂，优选为水和乙醇的混合溶剂；此外，作为特别的说明，在梯度洗脱中，所述的混合溶剂包括甲醇或者乙醇的浓度为0的溶剂体系；

(3)丹酚酸B、迷迭香酸的纯化：以体积比为1-5:5-10:1-5:1-10的溶剂A、溶剂B、溶剂C、溶剂D组成高速逆流溶剂体系，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速(优选800r/min转速)下，以0.5～5ml/min(优选1.8ml/min)的流速注入流动相，取步骤(2)得到的丹酚酸B和迷迭香酸的混合粗提物，用上相、下相体积比1：1的混合溶剂溶解后进样，分别收集丹酚酸B的流出液和迷迭香酸的流出液，浓缩、干燥，得到丹酚酸B、迷迭香酸；

所述溶剂A为甲醇、乙醇、正己烷或异己烷，所述溶剂B为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，所述溶剂C为甲醇、乙醇或丙酮，所述溶剂D为水。

作为优选，步骤(1)中，乙醇溶剂的体积用量以粗粉的质量计为5～20L/kg，每次回流提取的时间为30-60min，提取次数为1-3次。

步骤(1)中，所述乙醇溶剂优选体积分数50％的乙醇溶剂。

作为优选，所述步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为非极性、弱极性或中极性的大孔吸附树脂，进一步优选为D101、AB-8、HPD300等大孔吸附树脂，更优选HPD300大孔吸附树脂。

作为优选，步骤(2)中，所述梯度洗脱条件为先用2-6倍柱体积的水洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数10％-30％乙醇或甲醇的水溶液(优选乙醇水溶液)洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数20％-40％乙醇或甲醇水溶液(优选乙醇水溶液)洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数30％-50％乙醇或甲醇水溶液(优选乙醇水溶液)洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数40％-60％乙醇或甲醇水溶液(优选乙醇水溶液)洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数50％-95％乙醇或甲醇水溶液(优选乙醇水溶液)洗脱。

进一步，所述梯度洗脱优选为：