[发明专利]一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸B和迷迭香酸的方法

权利要求书

1.一种利用高速逆流色谱分离纯化制备丹酚酸B和迷迭香酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将丹参药材粉碎成粗粉，加入体积分数10％-95％的乙醇水溶液中，加热至回流提取数次，提取液趁热过滤，冷却，滤液减压除去溶剂，得到乙醇提取物；

(2)丹酚酸B、迷迭香酸的富集：将步骤(1)得到的乙醇提取物加入填充有大孔吸附树脂的色谱柱中，用水和甲醇或乙醇的混合溶剂梯度洗脱，收集含有丹酚酸B和迷迭香酸的洗脱液，减压回收溶剂，干燥、得到丹酚酸B和迷迭香酸的混合粗提物；

(3)丹酚酸B、迷迭香酸的纯化：以体积比为1-5:5-10:1-5:1-10的溶剂A、溶剂B、溶剂C、溶剂D组成高速逆流溶剂体系，将所述高速逆流溶剂体系混合充分后静置，按上下两相分开，取上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱仪的多层线圈分离柱，设定高速逆流色谱仪，在500～1000r/min转速下，以0.5～5ml/min的流速注入流动相，取步骤(2)得到的丹酚酸B和迷迭香酸的混合粗提物，用上相、下相体积比1：1的混合溶剂溶解后进样，分别收集丹酚酸B的流出液和迷迭香酸的流出液，浓缩、干燥，得到丹酚酸B、迷迭香酸；

所述溶剂A为甲醇、乙醇、正己烷或异己烷，所述溶剂B为乙酸乙酯、乙酸丙酯或乙酸正丁酯，所述溶剂C为甲醇、乙醇或丙酮，所述溶剂D为水。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，乙醇溶剂的体积用量以粗粉的质量计为5～20L/kg，每次回流提取的时间为30-60min，提取次数为1-3次。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)中，所述乙醇溶剂为体积分数50％的乙醇溶剂。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为非极性、弱极性或中极性的大孔吸附树脂。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于步骤(2)中，所述大孔吸附树脂为D101、AB-8或HPD300大孔吸附树脂。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(2)中，所述梯度洗脱条件为先用2-6倍柱体积的水洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数10％-30％乙醇或甲醇的水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数20％-40％乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数30％-50％乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数40％-60％乙醇或甲醇水溶液洗脱，再用2-6倍柱体积的体积分数50％-95％乙醇或甲醇水溶液洗脱。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述溶剂A为正己烷，所述溶剂B为乙酸乙酯，所述溶剂C为乙醇。

8.如权利要求1或7所述的方法，其特征在于所述步骤(3)中，所述溶剂A、溶剂Ｂ、溶剂C的体积比为3:7:1:9。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述的高速逆流色谱仪中采用波长190-380nm的紫外检测器检测，根据紫外检测器光谱图的峰形对流出液进行区分。

10.如权利要求9所述的方法，其特征在于步骤(3)中，所述紫外检测器的波长为254～300nm。