[发明专利]检测哮喘易感基因ADRB2突变位点的探针和方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及检测哮喘易感基因ADRB2突变位点的专用探针、引物、基因芯片和方法。

背景技术

哮喘是一种常见的气道的慢性炎症性疾病，到2011年调查数据显示，全球有2.35亿至3亿人受到影响，大约25万人因此失去生命。这一大规模爆发的流行病具有明显的遗传倾向，有一定的家族聚集性，哮喘的发生是环境中过敏原和自身易感性共同作用结果。本发明选取了一个与哮喘发生关联度较大的基因，并对其进行多态性检测。这个基因的生理功能和哮喘关联分别解释如下：

ADRB2这一基因编码Beta2型肾上腺素受体。它是交感神经系统的重要组成部分，调节包括心率、血管紧张性、肾脏的水钠排泄和潴留以及脂肪分解等多种生理代谢活动。哮喘的发生与气道平滑肌紧张密切相关，ADRB2基因编码的β2肾上腺素受体以儿茶酚胺为内源性配体，主要通过第二信使cAM调节平滑肌的紧张性。ADRB2基因的多态性导致调节平滑肌紧张性能力的改变，进而影响哮喘的易感性。

传统的直接测序法检测基因突变位技术，检测仪器昂贵，体系设计复杂，重复性差；而其他如荧光定量PCR检测技术，灵敏度较低，检测结果易产生误差。基因芯片技术是一种新兴的DNA检测技术，具有高通量、高灵敏度、高特异性等特点，能在短时间内获得大量的基因信息。目前基因芯片已经在癌症诊断等方面取得了一些应用，然而对于哮喘易感基因突变位点的检测仍处于初步开发阶段。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测哮喘易感基因ADRB2突变位点的专用探针、引物、基因芯片和方法。

本发明提供的一种检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的专用探针，其是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的DNA片段的混合物，或者是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示序列的反向互补序列的DNA片段的混合物。

上述探针检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的靶序列是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示的DNA片段，或者是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.1所示序列的反向互补序列的DNA片段。

本发明提供的一种检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的基因芯片，其含有如前所述的专用探针。

本发明提供的一种检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的装置，其包括如前所述的专用探针，或者包括含有专用探针的DNA芯片。所述的装置还包括引物对，所述的引物对中，一条引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO.2，另一条引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO.3所示。所述的引物对含有荧光标记。

本发明提供的检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的引物，其是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3所示的DNA片段。优选所述的引物上含有荧光标记。

本发明提供的一种检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的方法，包括以下步骤：

(1)制备待测样本的总DNA，作为模板，用含检测标记的引物对进行PCR扩增，获得PCR产物，所述的引物对中，一条引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO.2，另一条引物的核苷酸序列如序列表中的SEQ ID NO.3所示；

(2)将专用探针结合于基因芯片的片基上，洗去未结合的探针，获得检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的基因芯片，所述的专用探针是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的DNA片段的混合物，或者是核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示序列的反向互补序列的DNA片段的混合物；

(3)在步骤(2)所得的检测哮喘易感基因ADRB2的突变位点的基因芯片中加入步骤(1)所得的PCR产物，进行杂交，洗去未杂交的PCR产物；

(4)检测步骤(3)所得的杂交后的基因芯片。

其中，步骤(1)所述的制备待测样本的总DNA的方法是常规的。所述PCR的扩增方法也是常规的，较佳的PCR扩增程序如下：95℃预热5min；35个循环：95℃30s，55℃30s，72℃30s；最后72℃延伸5min。