[发明专利]一种γ-亚麻酸产生菌及其应用

说明书

技术领域

    本发明涉及微生物发酵领域，具体涉及一种γ-亚麻酸产生菌及其应用。 

背景技术

γ-亚麻酸(γ-linolenic acid)是一系列多不饱和脂肪酸的一个重要分支。根据脂肪酸 碳链的长短不同,可分为长链脂肪酸,中链脂肪酸和短链脂肪酸,碳链长度为 18 的γ- 亚麻酸则属于长链脂肪酸的一种。根据饱和度来判断,又可将脂肪酸分为饱和脂肪酸 (Saturated fatty acid)、一价多不饱和脂肪酸(Monoursaturated fatty acid)、多不饱和脂 肪酸(Polysaturated fatty acid)三种。作为一种人体必不可少的脂肪酸,它是人体中多 个重要反应的中间产物,例如由亚油酸转化,可生成前列腺素和白细胞介素等的前体物质。由于对于中老年人,它可以起到增强其身体抵抗力的功效。 

    γ-亚麻酸(γ -linolenic acid)是一种人体必需的对其产生多种生理功能的多稀不饱 和脂肪酸。它是参与人体多种生化反应,并与人体代谢和生长发育息息相关的一种重要 中间物质。具有广泛的医用实用价值。目前国际上常用的方法是从植物种子油中提取γ -亚麻酸;另一种是通过丝状真菌发酵产生。而近些年,由于不受环境影响,成本 相对较低等特点,γ-亚麻酸的发展方向越来越侧重于工业化发酵的研究。本专利以 γ-亚麻酸(γ -linolenic acid)生产菌种小克银汉霉菌(Cunningnamel laelegans)为研究 对象,从菌种诱变到菌种筛选,以及发酵工艺优化等方面对小克银汉霉菌(Cunningnamel laelegans)进行多方面的研究。 

      目前，国内外已有利用霉菌进行γ-亚麻酸发酵的报道，如专利CN103484382A公开了一种高产γ-亚麻酸的突变株及制备方法和应用，利用深黄被孢霉进行发酵生产γ-亚麻酸。但这些方法大都产量不高，且发酵产物中杂酸偏多，不利于后道提取分离。因此研究一种适于工业生产的γ-亚麻酸生产途径具有很好的研究意义和很大的发展空间。 

发明内容

为了解决目前的小克银汉霉菌γ-亚麻酸产量低，无法满足工业化生产的问题，本发明提供一种γ-亚麻酸产生菌及其应用。 

本发明采用的技术方案如下： 

一种γ-亚麻酸产生菌，其分类命名为雅致小克银汉霉（Cunningnamel laelegans）CLA-N2-V已于2014年5月8日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号CCTCC NO： M 2014191，地址：中国 武汉 武汉大学。

本发明所述的γ-亚麻酸产生菌雅致小克银汉霉（Cunningnamel laelegans） CLA-N2-V的诱变筛选方法是：将γ-亚麻酸出发菌株雅致小克银汉霉（Cunningnamel laelegans）CLA-N2，经离子束诱变后，通过摇瓶发酵筛选获得γ-亚麻酸产量高的菌株作为下一轮诱变的出发菌株，重复上述诱变过程，最后筛选出γ-亚麻酸产量高的目标菌株雅致小克银汉霉（Cunningnamel laelegans）CLA-N2-V，形态学及生理生化学特征如下： 

菌落颜色：灰白色。

需氧方式：好氧生长。 

菌落大小：6~8 mm。 

适宜生长温度：27℃。 

适宜生长pH：6.5。 

菌体形态：圆形菌落，无光泽。 

本发明所提供的γ-亚麻酸产生菌的诱变方法，具体步骤如下： 

(a)、单孢子悬浮液制备：将出发菌株雅致小克银汉霉（Cunningnamel laelegans）CLA-N2孢子制成孢子悬液，镜检无细胞重叠。

(b)、低能氮离子注入诱变：取0.1mL的步骤(a)中单孢子悬液均匀涂布于无菌空平皿上，以无菌风吹干，在10~18KeV、注入剂量为40×10¹⁴~240×10¹⁴ions/cm²下，对雅致小克银汉霉CLA-N2进行氮离子注入，离子注入完毕后，取出平皿，在无菌环境下用1mL无菌水洗脱，涂布到固体培养基上，在26~30℃下倒置培养24~48h。 

   (c)、诱变菌株的筛选：