[发明专利]水中病毒分离提取装置及水中札幌病毒的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于水中病毒提取领域；具体涉及水中病毒分离提取装置及利用该装置提取水中札幌病毒的方法。

背景技术

水中的病毒对人体健康的风险日益受到关注,对环境水体中病毒的检测是预防疾病、评估水源卫生质量、环境卫生状况的一项有价值的工作。

现有水中微生物过滤器的内胆与上盖的重合性不好，随压力增大，上盖的密闭性降低，容易漏气。

病毒引起的胃肠疾病对人类有着极大的危害。札幌病毒(Sapovirus/SaV)是引起急性腹泻的常见病毒，该病毒于1977年日本札幌地区肠道疾病暴发流行过程中被发现，SaV属于杯状病毒家族，由单链RNA构成无衣壳结构，在环境中可以稳定存在，能够引起人胃肠疾病,其拥有极低的感染剂量，在感染后又具有极高的释放量(达到每克粪便样本10¹¹个病毒颗粒)。

目前，已有报道的病毒的传播途径包括被污染的食物、水、人与人接触和呕吐气浊物接触。相对于细菌来说，病毒更加难以灭活和消除。这些病毒通常能够在各种水样中被监测到，如：污水，河水，地下水，海水甚至饮用水。由这些水体中检测病毒的存在与否，关键环节在于如何由水中将病毒分离提取出来。由于水中病毒的含量相对较低，且病毒颗粒较小，难以利用离心、过滤等分离细菌的常规富集方法收集。由于设备和提取方法的限制，水体中病毒的提取和检出费时费力。

发明内容

本发明要解决现有微生物过滤器存在容易漏气的技术问题；而提供一种密封性好、过滤水中病毒效果好，易于拆卸组装，易于多次重复灭菌使用的的水中病毒分离提取装置。

为解决上述技术问题，本发明的水中病毒分离提取装置包括氮气压力罐、存储罐、过滤器和滤膜支架，所述的存储罐包括罐体和顶盖，罐体设有穹顶，穹顶设有弧形缩口，顶盖底端设有外翻沿，密封圈置于外翻沿内，顶盖由弧形缩口伸入并可通过密封圈卡在弧形缩口内，顶盖顶端对称设有耳座，耳座内装有杠杆，杠杆包括一个“n”字形的提杆、两个弧形的连接杆及两个横折形的支撑杆，所述提杆两端与连接杆通过过渡圆弧连接，连接杆的另一端与支撑杆圆弧过渡连接，杠杆的支撑杆套在耳座内，支撑杆的底端可抵在穹顶上，过渡圆弧可抵在穹顶上，穹顶上分别设有压力表、进气管和出水管，存储罐的进气管与氮气压力罐连接，出水管底端穿过穹顶伸入到罐体底部，出水管顶端设有控制阀，控制阀与过滤器通过两端连接快速接头的导管连接，过滤器与滤膜支架通过两端连接快速接头的导管连接，滤膜支架设有放水管；所述滤膜支架内设有正电荷滤膜。

出水管底端面与存储罐底部的距离为0.1～0.2mm，使分离水中病毒的效果好，分离的彻底。

密封圈的截面为圆形或椭圆形，使密闭性更好。

本发明中顶盖通过杠杆将其由内向外卡在穹顶上，易于安装拆卸，并且随着存储罐压力变大，顶盖与存储罐结合更加紧密，因此，密闭性就更好，不易产生泄漏气体的现象。

本发明采用的过滤器通过快速接头与导管连接，可以根据不同水质需要组合滤芯种类和滤器数量，降低水样水中杂质含量，降低滤膜因杂质干扰带来的损耗影响。

存储罐即可采用消毒液浸泡灭菌也可采用高温高压灭菌，或采用两种方法相结合灭菌，可以彻底消除二次污染对分子诊断学检测带来的影响。

本发明的装置结构简单，构思巧妙。

另外，本发明又提供了一种提取效率高、提取产物干扰少、提取产物适用于多种检测平台的水中札幌病毒提取方法。

水中札幌病毒提取方法中利用上述的装置进行过滤、洗脱，具体提取方法是按下述步骤进行的：

步骤一、将水样装入存储罐中，闭合顶盖，通入氮气，存储罐内的压力上升至0.7个标准大气压，打开控制阀，使水样通过过滤器流向滤膜支架，待水样全部通过滤膜支架内的正电荷滤膜后停止进样，关闭氮气存储罐，使罐体泄压，更换新的存储罐；

步骤二、将pH值为9.5～9.75的牛肉浸提物溶液加入更换后的存储罐内，通入氮气，存储罐内的压力上升至0.7个标准大气压，打开控制阀，使牛肉浸提物溶液流向滤膜支架进行洗脱，待全部通过滤膜支架内的正电荷滤膜后停止进样，通过放水管收集洗脱液，关闭氮气存储罐，使罐体泄压；

步骤三、然后进行等电点沉降法处理后离心，重溶后二次浓缩，再提取核酸；即完成了札幌病毒的提取。