[发明专利]水中病毒分离提取装置及水中札幌病毒的提取方法

权利要求书

1.水中病毒分离提取装置，它包括氮气压力罐(1)、存储罐(2)、过滤器(3)和滤膜支架(4)，其特征在于所述的存储罐(2)包括罐体(10)和顶盖(7)，罐体(10)设有穹顶(11)，穹顶(11)设有弧形缩口(12)，顶盖(7)底端设有外翻沿(14)，密封圈(13)置于外翻沿(14)内，顶盖(7)由弧形缩口(12)伸入并可通过密封圈(13)卡在弧形缩口(12)内，顶盖(7)顶端对称设有耳座(15)，耳座(15)内装有杠杆(16)，杠杆(16)包括一个“n”字形的提杆(161)、两个弧形的连接杆(162)及两个横折形的支撑杆(163)，所述提杆(161)两端与连接杆(162)通过过渡圆弧(164)连接，连接杆(162)的另一端与支撑杆(163)圆弧过渡连接，杠杆(16)的支撑杆(163)套在耳座(15)内，支撑杆(163)的底端可抵在穹顶(11)上，过渡圆弧(164)可抵在穹顶(11)上，穹顶(11)上分别设有压力表(6)、进气管(8)和出水管(9)，存储罐(2)的进气管(8)与氮气压力罐(1)连接，出水管(9)底端穿过穹顶(11)伸入到罐体(10)底部，出水管(9)顶端设有控制阀(17)，控制阀(17)与过滤器(3)通过两端连接快速接头的导管连接，过滤器(3)与滤膜支架(4)通过两端连接快速接头的导管连接，滤膜支架(4)设有放水管(5)；所述滤膜支架(4)内设有正电荷滤膜。 

2.根据权利要求1所述水中病毒分离提取装置，其特征在于出水管(9)底端面与罐体(10)底部的距离为0.1～0.2mm。 

3.根据权利要求1所述水中病毒分离提取装置，其特征在于密封圈(13)的截面为圆形或椭圆形。 

4.根据权利要求1所述水中病毒分离提取装置，其特征在于所述的正电荷滤膜为NanoCeram正电荷滤膜。 

5.水中札幌病毒的提取方法，其特征在于水中札幌病毒提取方法中利用 权利要求1所述的装置进行过滤、洗脱，具体提取方法是按下述步骤进行的： 

步骤一、将水样装入存储罐(2)中，闭合顶盖(7)，通入氮气，存储罐(2)内的压力上升至0.7个标准大气压，打开控制阀(17)，使水样通过过滤器(3)流向滤膜支架(4)，待水样全部通过滤膜支架(4)内的正电荷滤膜后停止进样，关闭氮气存储罐(2)，使存储罐(2)内泄压，更换新的存储罐(2)； 

步骤二、将pH值为9.5～9.75的牛肉浸提物溶液加入更换后的存储罐(2)内，通入氮气，存储罐(2)内的压力上升至0.7个标准大气压，打开控制阀17，使牛肉浸提物溶液流向滤膜支架(4)进行洗脱，待全部通过滤膜支架(4)内的正电荷滤膜后停止进样，通过放水管(5)收集洗脱液，关闭氮气存储罐(2)，使存储罐(2)内泄压； 

步骤三、然后进行等电点沉降法处理后离心，重溶后二次浓缩，再提取核酸；即完成了札幌病毒的提取。 

6.根据权利要求5所述的水中札幌病毒的提取方法，其特征在于步骤三所述的等电点沉降法是按下述步骤进行的：利用1.2mol/L HCl调节洗脱液的pH值至4.0，然后加入获得洗脱液体积0.1％的0.5mol/L FeCl₃，用1.2mol/LHCl调节pH值至3.5。 

7.根据权利要求6所述的水中札幌病毒核酸提取方法，其特征在于步骤三在4℃条件下离心15min。 

8.根据权利要求7所述的水中札幌病毒核酸提取方法，其特征在于步骤三所述重溶具体操作：在生物安全柜中，小心弃上清，过程中不要悬浮沉淀；然后用10mLPBS小心溶解沉淀，转移至50mL离心管中；再加入带有抗生素的1×MEM至终体积30mL，0.22μM滤器过滤溶液，-70℃保藏备用。