[发明专利]FGFR1基因实时PCR检测方法及其试剂盒和引物

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测领域，尤其涉及FGFR1基因实时PCR检测方法及其试剂盒和引物。

背景技术

成纤维生长因子受体1(FGFR1)分子靶点是一种新型有效蛋白靶点，近些年发现在部分乳腺癌、膀胱癌、恶性神经胶质瘤、脑膜瘤等肿瘤组织中FGFR1基因高度扩增，同时伴有FGFR1蛋白过度表达，其肿瘤发生机理是成纤维生长因子(FGF)与FGFR1结合，从而激发受体的酪氨酸激酶活性，使结合于激酶区的底物（信号分子）发生磷酸化，引发细胞内的一系列信号传导途径，刺激细胞繁殖、肿瘤生长，FGFR1可以与多种FGF结合。含有FGFR1基因高度扩增的肿瘤细胞对FGFR1信号传导有着依赖性，因此可以应用FGFR1抑制剂来抑制这些肿瘤细胞生长、导致肿瘤细胞凋亡，从而达到治疗癌症的效果。事实上，国际上有十多家公司（包括Boehringer Ingelheim, 诺华，施贵宝等等）已经开发了十多种不同的能够抑制FGFR1的药物。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种FGFR1基因实时PCR检测方法，本发明的第二个目的是提供上述方法使用的试剂盒，本发明的第三个目的是提供上述的方法采用的寡聚核苷酸引物。该方法具有稳定性好，灵敏性高的特点。

为了实现上述的第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种FGFR1基因实时PCR检测方法，该方法利用寡聚核苷酸引物对从肿瘤组织或细胞中提取的基因组DNA或者游离于血液或尿液中的为模板进行PCR扩增，所述的寡聚核苷酸引物的序列如下：

FP 5’-GCTAGGTGCCGAGGGTGTT-3’

RP5’-ACTGCAGGCTCCTTCAGAAC-3’；

上述的方法用于非疾病的诊断和治疗。

作为优选，该方法还包括使用一个荧光标记探针。再优选，所述的荧光标记探针选用TaqMan探针。最优选，所述的荧光标记探针的核苷酸顺序为5’-FAM-CAAAGGTTAGGGAGGCAC-MGB-3’。

所述肿瘤细胞或组织可以是任何人肿瘤细胞和组织。作为优选，所述的肿瘤细胞或组织为乳腺癌、非细胞肺癌、膀胱癌、口腔鳞癌、食道鳞状细胞癌、卵巢癌或前列腺癌。再优选，所述的肿瘤细胞或组织为乳腺癌或肺鳞癌细胞或组织。

为了实现上述的第二个目的，本发明采用了以下的技术方案：

一种用于FGFR1基因实时PCR检测的试剂盒，该试剂盒包括一组寡聚核苷酸引物，所述的寡聚核苷酸引物的序列如下：

FP 5’-GCTAGGTGCCGAGGGTGTT-3’

RP5’-ACTGCAGGCTCCTTCAGAAC-3。

作为优选，该试剂盒还包括荧光标记探针。再优选，所述的荧光标记探针选用TaqMan探针。最优选，所述的荧光标记探针的核苷酸顺序为5’-FAM-CAAAGGTTAGGGAGGCAC-MGB-3’。

为了实现上述的第三个目的，本发明采用了以下的技术方案：

寡聚核苷酸引物，所述的寡聚核苷酸引物的序列如下：

FP5’-GCTAGGTGCCGAGGGTGTT-3’

RP 5’-ACTGCAGGCTCCTTCAGAAC-3’。

本发明利用FGFR抑制剂对肿瘤病人进行个性化的靶向治疗，首先需要筛选出那些在癌细胞中有FGFR1基因扩增的病人。因此本发明涉及一种基因诊断试剂盒，通过检测肿瘤组织中FGFR1的扩增情况，确定癌症的病变因素和制定有效治疗方案。如果存在FGFR1高度扩增情况，可以推荐患者接受FGFR抑制剂药物治疗，使适宜FGFR靶向治疗的患者获益；如果不存在FGFR1高度扩增，应及时考虑其它治疗药物，避免使患者蒙受药物的潜在毒性作用及不必要的经济负担，并错过最佳治疗时机。FGFR1基因扩增检测试剂盒的开发将带来极大的社会效益。

附图说明

图1 显示本发明的扩增体系检测FGFR1：GAPDH=1:1基因扩增图。

图2显示本发明的扩增体系检测FGFR1：GAPDH=2:1基因扩增图。

图3显示本发明的扩增体系扩增 HT29细胞株基因组DNA的结果图。

图4显示本发明的扩增体系扩增 SW480细胞株基因组DNA的结果图。

具体实施方式

实施例 1