[发明专利]一种拉曼可视化快速检测藻毒素高灵敏纸的制备方法及检测方法

权利要求书

1.一种拉曼可视化快速检测藻毒素高灵敏纸的制备方法，其特征在于步骤为：

（1）制备具有拉曼信号的金标记抗体：首先将拉曼信标分子4-氨基苯硫酚和金纳米粒子过夜反应，利用4-氨基苯硫酚的巯基和金表面形成稳定的金硫键；过夜反应后，离心，用pH8.0的硼酸缓冲液重悬，再加入藻毒素抗体，使得藻毒素抗体终浓度为10μg/mL；振荡标记2h，加入牛血清白蛋白封闭未反应的位点2h，终浓度0.5%；离心，后加入PBS重悬到原始体积；

（2）试纸条的制备：将步骤（1）制备好的具有拉曼信号的金标记抗体，均匀浸泡到金标结合垫上，然后烘干；同时在塑料底板上依次组装样品垫玻璃纤维膜、硝酸纤维素膜和吸水纸，将金标结合垫组装到塑料底板上使之在样品垫玻璃纤维膜和硝酸纤维素膜之间相互叠加1mm；将藻毒素抗原MC-LR-BSA及羊抗鼠二抗依次喷到硝酸纤维膜上烘干2h，作为检测线及质控线；

然后将组装好的片状试纸条在切条机器上切成宽3mm每条的单个试纸条，组装到塑料卡壳中，单个封装，干燥保存。

2.用权利要求1所述拉曼可视化快速检测藻毒素高灵敏纸的检测方法，其特征在于步骤为：

（1）标准曲线的绘制：将不同浓度的藻毒素标准品滴加到试纸条上的样品孔中，5min后，在拉曼光谱仪器上进行检测；所使用藻毒素标准品浓度依次为：0、0.05ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL，对所得到的拉曼谱图进行鉴定，得到不同藻毒毒浓度下的拉曼光谱图，并根据信号分子的特征峰值得到标准曲线；

（2）实际样品检测方法的确立：应用所开发的拉曼试纸条对自来水和湖水中的藻毒素污染情况进行检测，并根据标准曲线进行对比，得到检测样品中藻毒素的浓度。