[发明专利]一种涂覆羧甲基纤维素偶联RGD短肽的细胞培养板的制备方法和应用

权利要求书

1.一种涂有羧甲基纤维素的细胞培养板，其特征在于，在细胞培养板表面涂覆一层羧甲基纤维素膜，所述膜上偶联有RGD多肽。

2.如权利要求1所述的细胞培养板，其特征在于按照以下方法制备得到：

(1)用电子天平称取羧甲基纤维素0.25～1g，用20ml的10～30％氨水混合，超声200～600秒，加10～30ml蒸馏水稀释，备用；

(2)将聚苯乙烯培养板用无水乙醇、蒸馏水洗三遍，真空干燥，备用。

(3)将步骤(1)中的溶液滴加到步骤(2)的培养板中，液面要完全覆盖培养板底部(约8滴)，然后将滴加过(1)溶液的聚苯乙烯培养板放入60℃真空干燥箱中30分钟；

(4)用电子天平称取5～10g碳化二亚胺、4～8g羟基琥珀酰亚胺)以及12.1875g2-吗啉乙磺酸水合物，用50ml蒸馏水将其溶解，放入4℃冰箱，备用；

(5)将(4)中所配的溶液滴加到步骤(3)的培养板中液面要完全覆盖培养板底部(约5滴)，放入30℃烘箱1～2小时；

(6)将(5)中的培养板中的混合液体弃之，并将0.5～2g/L的多肽溶液加入(5)中的细胞培养板中，每孔1～2mL，并放在摇床上反应12～48小时；

(7)24小时过后，将(6)中的细胞培养板中的液体弃置，并用大量的PH＝7.35的磷酸缓冲溶液冲洗，冲洗后烘干，封存。

3.一种制备权利要求1所述的涂覆有羧甲基纤维素的细胞培养板的方法，其特征在于使用碳化二亚胺和羟基琥珀酰亚胺以及2-吗啉乙磺酸水合物偶联方法在培养板表面接枝引入多肽。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于所述多肽的序列为RGDKKK。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)用电子天平称取羧甲基纤维素0.25～1g，用20ml的10～30％氨水混合，超声200～600秒，加10～30ml蒸馏水稀释，备用；

(2)将聚苯乙烯培养板用无水乙醇、蒸馏水洗三遍，真空干燥，备用。

(3)将步骤(1)中的溶液滴加到步骤(2)的培养板中，液面要完全覆盖培养板底部(约8滴)，然后将滴加过(1)溶液的聚苯乙烯培养板放入60℃真空干燥箱中30分钟；

(4)用电子天平称取5～10g碳化二亚胺、4～8g羟基琥珀酰亚胺)以及12.1875g2-吗啉乙磺酸水合物，用50ml蒸馏水将其溶解，放入4℃冰箱，备用；

(5)将(4)中所配的溶液滴加到步骤(3)的培养板中液面要完全覆盖培养板底部(约5滴)，放入30℃烘箱1～2小时；

(6)将(5)中的培养板中的混合液体弃之，并将0.5～2g/L的多肽溶液加入(5)中的细胞培养板中，每孔1～2mL，并放在摇床上反应12～48小时；

(7)24小时过后，将(6)中的细胞培养板中的液体弃置，并用大量的PH＝7.35的磷酸缓冲溶液冲洗，冲洗后烘干，封存。

6.权利要求1所述细胞培养板在培养人成骨细胞中的应用。