[发明专利]一种筛选抗回生水稻品种的方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品生物技术领域，特别是涉及一种高效筛选抗回生水稻品种的方法。

背景技术

常见筛选抗回生水稻品种的方法是通过杂交、基因重组等生物技术手段培育新品种，继而测定新品种的回生特性。这类方法有两个缺陷：一是实验的盲目性，大量实验结果可能一个抗回生水稻品种也筛选不到；二是回生率测定过程淀粉浓度、糊化温度、时间、淀粉液pH值等因素影响不同批次水稻淀粉回生率测定结果的一致性、重现性，造成不同批次间测定结果可比性降低，从而给筛选抗回生水稻品种的界定带来不确定性。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的技术缺陷，而提供一种高效筛选抗回生水稻品种的方法。

为实现本发明的目的所采用的技术方案是：

一种筛选抗回生水稻品种的方法，包括下述步骤：

将大米支链淀粉加入水中配成10-15％溶液，调节溶液pH值为6.0-7.0，然后加入溶液体积1-3‰的酶活力单位为120-180U/g的普鲁兰酶以分解1,6-糖苷键产生无分支的多糖，在45-55℃酶解6-10小时，然后离心；离心后的上清液上凝胶色谱仪层析,测定支链淀粉链长分布；如果大米支链淀粉的侧链长度分布集中于聚合度为3-6的范围的侧链比率高于60％，则为抗回生水稻，如果此比率低于20％则为高回生水稻品种；所述大米支链淀粉以大米原淀粉为原料制备得到。

酶解时加两滴0.2-0.4％氯化钙以增强普鲁兰酶活力。

所述大米支链淀粉的制备方法为：用常规碱法从大米中提取大米淀粉，将大米淀粉制成淀粉乳液，将浓度为1-3％的淀粉乳液于90-98℃糊化30min，之后加水和正丁醇，离心后取上清液；所得上清液加入无水乙醇，调节酒精度为60-85％，搅拌离心后沉淀即为大米支链淀粉。

所述大米淀粉的制备方法为：将大米粉放入碱液中浸泡7-10h，之后离心得到大米淀粉。

所述碱液为NaOH溶液，NaOH溶液的质量分数为0.2-0.5％、NaOH溶液浸泡温度为25-35℃，大米与NaOH溶液的质量体积比为1:6-10。

糊化后水的加入量为：淀粉和水的比例为1:500-1000，正丁醇的加入量为淀粉乳液的3-5倍体积。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

1、本发明的方法采用从原淀粉中分离支链淀粉，继而通过测定支链淀粉链长分布来鉴别抗回生水稻品种，而非通过测定淀粉回生率，避开了糊化温度、时间等环境条件对测定结果的干扰，提高了鉴别准确度，减少了测定工序。

2、本发明的方法工艺简单，容易实现，筛选抗回生水稻品种的成本低。

附图说明

图1所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-35支链淀粉链长分布照片；

图2所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-36支链淀粉链长分布照片；

图3所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-19支链淀粉链长分布照片；

图4所示为实施例1中抗回生水稻品种ZP-13支链淀粉链长分布照片；

图5所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-13支链淀粉链长分布照片；

图6所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-8支链淀粉链长分布照片；

图7所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-3支链淀粉链长分布照片；

图8所示为实施例1中高回生水稻品种ZP-32支链淀粉链长分布照片。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1

(1)选取8种不同品种大米(ZP-36；ZP-35；ZP-15；ZP-19；ZP-13；ZP-3；ZP-32；ZP-8由天津市农作物研究所提供)，其中前四种回生率较低，后四种回生率较高。分别将不同品种的大米在90℃干燥3d后，经脱壳粉碎过100目筛子得到大米粉,然后将大米粉放入NaOH溶液中搅拌,其中料液比为1:6，NaOH质量分数0.2％，NaOH浸泡温度为25℃，NaOH浸泡时间7h。之后离心(3860r/min,5min)得到不同品种的大米淀粉。分别将不同品种的大米淀粉制成淀粉乳液。将不同品种的浓度为1％的淀粉乳液于90℃糊化30min，之后加水使淀粉和水的比例为1:500，加入淀粉乳液3倍体积的正丁醇，离心后沉淀为大米直链淀粉，取上清液加入无水乙醇，调节酒精度为60％，搅拌离心后沉淀即为不同品种的大米支链淀粉。