[发明专利]一种高产菊粉内切酶的双启动子多拷贝重组毕赤酵母菌株无效
| 申请号： | 201410215648.0 | 申请日： | 2014-05-21 |
| 公开（公告）号： | CN103981112A | 公开（公告）日： | 2014-08-13 |
| 发明（设计）人： | 林建强;林胜强;白杨;林建群 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P19/04;C12R1/84 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 李健康 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高产 菊粉 内切酶 启动子 拷贝 重组 酵母 菌株 | ||
1.一种高产菊粉内切酶INU2的双启动子多拷贝重组毕赤酵母工程菌株，其特征在于：所述菌株命名为巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115-A3-G2，已于2014年04月16日保藏于“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”，保藏编号为CGMCCNO：9049。
2.权利要求1所述高产菊粉内切酶INU2的双启动子多拷贝重组毕赤酵母工程菌株的构建方法，步骤是：
克隆菊粉内切酶基因INU2，将菊粉内切酶基因，通过限制性内切酶位点分别与毕赤酵母表达质粒pPIC9K和pGAPZαA连接获得重组表达载体pPIC9K-INU2和pGAPZαA-INU2；然后将pPIC9K-INU2导入巴斯德毕赤酵母GS115中，通过遗传霉素G418筛选得到多拷贝AOX启动子的转化子，再将pGAPZαA-INU2导入多拷贝AOX启动子的转化子中，通过博来霉素抗性筛选获得多拷贝GAP启动子的转化子；用实时荧光定量PCR确定多拷贝转化子的拷贝数，对不同拷贝数的转化子进行诱导发酵比较，确定出产量最高的双启动子多拷贝转化子，即获得高产菊粉内切酶INU2的双启动子多拷贝重组巴斯德毕赤酵母工程菌株。
3.如权利要求2所述高产菊粉内切酶INU2的双启动子多拷贝重组毕赤酵母工程菌株的构建方法，其特征在于：所述产量最高的双启动子多拷贝转化子是GS115-A3-G2，其中：GS115表示巴斯德毕赤酵母基因，A3表示有3个AOX启动子，G2表示有2个GAP启动子。
4.权利要求1所述高产菊粉内切酶INU2的双启动子多拷贝重组毕赤酵母工程菌在水解菊粉用于生产低聚果糖中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于山东大学，未经山东大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201410215648.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：集成自动拨打测试设备
- 下一篇：一种手控分配阀
