[发明专利]人多能干细胞培养基及人多能干细胞的培养方法

权利要求书

1.一种人多能干细胞培养基，其特征在于，包括基础培养基和添加剂；

其中，所述基础培养基为DMEM/F12培养基；

所述添加剂包括碳酸氢钠400～600μg/ml、硒酸钠8～20ng/ml、重组人胰岛素生长因子10～30ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子80～120ng/ml、重组人乳铁蛋白7～13μg/ml、抗坏血酸50～70μg/ml以及重组人转化生长因子1ng/ml～3ng/ml。

2.根据权利要求1所述的人多能干细胞培养基，其特征在于，所述添加剂包括碳酸氢钠520～580μg/ml、硒酸钠12～16ng/ml、重组人胰岛素生长因子15～25ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子90～110ng/ml、重组人乳铁蛋白10～12μg/ml、抗坏血酸63～66μg/ml以及重组人转化生长因子1.5ng/ml～2.5ng/ml。

3.根据权利要求2所述的人多能干细胞培养基，其特征在于，所述添加剂包括碳酸氢钠543μg/ml、硒酸钠14ng/ml、重组人胰岛素生长因子20ng/ml、重组人碱性成纤维细胞生长因子100ng/ml、重组人乳铁蛋白11μg/ml、抗坏血酸65μg/ml以及重组人转化生长因子2ng/m。

4.根据权利要求1所述的人多能干细胞培养基，其特征在于，所述基础培养基在4～8℃下保存，所述添加剂在-20～-80℃下冰冻保存。

5.根据权利要求4所述的人多能干细胞培养基，其特征在于，所述人多能干细胞培养基在使用前配制，具体包括以下步骤：

在2～8℃下化冻所述添加剂；

将所述添加剂与所述基础培养基以7:500的体积配混合后形成所述人多能干细胞培养基。

6.根据权利要求1所述的人多能干细胞培养基，其特征在于，所述人多能干细胞培养基在使用前0～14天配制，并在2～8℃下保存。

7.一种人多能干细胞的培养方法，其特征在于，采用如权利要求1至6中任一项所述的人多能干细胞培养基培养。

8.根据权利要求7所述的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，将人多能干细胞接种到铺有基质胶或玻璃粘连蛋白的培养皿中；

S2，向所述培养皿中加入人多能干细胞培养基，每隔一天换一次所述人多能干细胞培养基。

9.根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于，所述培养方法进一步包括：

S3，当所述人多能干细胞汇合度达到70％～80％时进行传代培养，使用0.5m MEDTA消化所述人多能干细胞为小团块，将所述小团块接种到铺有基质胶或玻璃粘连蛋白的培养皿中，用所述人多能干细胞培养基进行培养。

10.根据权利要求8所述的培养方法，其特征在于，所述步骤S2是在温度为37℃，5％CO₂的培养箱中进行的。