[发明专利]一种布舍瑞林的制备方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及多肽合成技术领域。更具体地，本发明涉及一种布舍瑞林的制备方法。 

【背景技术】

布舍瑞林(Buserelin)的化学名是L-焦谷酰-L-组氨酰-L-色氨酰-L-丝氨酰-L-酪氨酰-D-(O-叔丁基)-丝氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-脯氨酰乙胺，其分子式为C₆₀H₈₆N₁₆O₁₃，分子量1239.4。布舍瑞林的化学结构式如下所示： 

Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt 

布舍瑞林是一种人工合成的促黄体生成素释放激素(LH-RH)类似物，由9个氨基酸组成，它的分子结构与LH-RH的区别是将后者的6-位和10-位Gly残基替代为D-Ser(tBu)-OH和乙胺。LH-RH是由下丘脑分泌的十肽激素，能促进垂体合成并释放黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)，激发青春期发育和调节生殖、生育及性激素产生。当外源性LH-RH或其类似物以生理脉冲频率(每90分钟一次)短期、小剂量给药时，对垂体性腺系统起促进作用，用于治疗性功能低下、不排卵、青春 期延缓；而以非生理脉冲频率长期、大剂量给药时，可抑制垂体分泌LH和FSH，导致性腺分泌激素能力下降，性器官萎缩，用于治疗一些激素依赖性疾病，如前列腺癌、子宫肌瘤、乳腺癌、子宫内膜异位症及青春期性早熟。布舍瑞林及其类似物具有很高的药用价值和广阔的市场前景，目前布舍瑞林已成为国际多肽药物市场的畅销产品之一。 

布舍瑞林结构中含有乙胺基修饰，同时含有组氨酸、精氨酸、色氨酸、丝氨酸和叔丁基保护的D-丝氨酸，难以找到合适的保护和脱保护策略，合成难度大。CN101735308A采用的液相合成工艺中涉及到复杂的保护策略，导致操作复杂，不利于工业生产采用。US6897289使用的Fmoc-His(Mmt)-OH和Fmoc-Tyr(2-Cl-Trt)-OH价格昂贵，不易获得。CN102190709A使用的Rink和Sieber树脂价格昂贵，其中Tyr(tBu)、Ser(tBu)、D-Ser(tBu)、His(Trt)保护是如何实现选择性脱除的没有特别说明，从策略上也很难实现。CN103517915A提到的Fmoc-Pro-Wang树脂的制备和碱性条件下裂解实现乙酰化修饰，都极易引起Pro和His的消旋。CN103554229A使用价格昂贵的氨基钠和碘乙烷制备乙胺基-CTC树脂，工艺复杂，大大增加合成成本。 

因此，开发一种低成本，操作简便，反应条件温和，环境污染小，易于实现产业化生产的布舍瑞林合成工艺很有必要。 

【发明内容】

[要解决的技术问题] 

本发明的目的是提供一种布舍瑞林的制备方法。 

[技术方案] 

本发明是通过下述技术方案实现的。 

本发明涉及一种布舍瑞林的制备方法。该制备方法的步骤如下： 

A、采用固相合成法，在N,N-二异丙基乙胺存在的条件下由Fmoc-Pro-OH和取代度0.6～1.3mmol/g的CTC树脂得到取代度0.4～0.9mmol/g的Fmoc-Pro-CTC树脂；其中CTC树脂与N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1：3～9； 

B、将步骤A得到的Fmoc-Pro-CTC树脂在除去Fmoc后，以与步骤A同样的方式，按照肽序列Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO₂)-Pro-OH使用偶联剂逐步偶联保护氨基酸，得到布舍瑞林-CTC树脂，所述保护氨基酸是指N端采用Fmoc保护的氨基酸； 

C、在以体积计0.5～3.5％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液里将步骤B得到的布舍瑞林-CTC树脂进行裂解，得到全保护肽； 

D、步骤C得到的全保护肽经过乙胺化、氢化、脱保护与纯化步骤后得到所述的布舍瑞林。 

根据本发明的一种优选实施方式，在步骤B中，使用的偶联剂是DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt或HCTU/HOBt。 

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，偶联时使用的有机碱是N,N-二异丙基乙胺。 

根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤B中，利用以体积计10～30％哌啶在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液处理除去保护氨基酸中的Fmoc。