[发明专利]一种布舍瑞林的制备方法

权利要求书

1.一种布舍瑞林的制备方法，其特征在于该方法的步骤如下：

A、采用固相合成法，在N,N-二异丙基乙胺存在的条件下由Fmoc-Pro-OH和取代度0.6～1.3mmol/g的CTC树脂得到取代度0.4～0.9mmol/g的Fmoc-Pro-CTC树脂；其中CTC树脂与N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1：3～9；

B、将步骤A得到的Fmoc-Pro-CTC树脂在除去Fmoc后，以与步骤A同样的方式，按照肽序列Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)–Leu-Arg(NO₂)-Pro-OH使用偶联剂逐步偶联保护氨基酸，得到布舍瑞林-CTC树脂，所述保护氨基酸是指N端采用Fmoc保护的氨基酸；

C、在以体积计0.5～3.5％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液里将步骤B得到的布舍瑞林-CTC树脂进行裂解，得到全保护肽；

D、步骤C得到的全保护肽经过乙胺化、氢化、脱保护与纯化步骤后得到所述的布舍瑞林。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤A中，使用的偶联剂是DIC/HOBt、PyBOP/HOBt、TBTU/HOBt、HBTU/HOBt或HCTU/HOBt。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤B中，偶联时使用的有机碱是N,N-二异丙基乙胺。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤B中，利用以体积计10～30％哌啶在N,N-二甲基甲酰胺中的溶液处理除去保护氨基酸中的Fmoc。

5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于在步骤B中，所述的Fmoc保护氨基酸是Fmoc-Arg(NO₂)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-D-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(Bzl)-OH、Fmoc-Trp-OH、Fmoc-Ser-OH、Fmoc-His(Trt)-OH或Pyr-OH。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤C中，所述的裂解是使用以体积计1.5％～2.5％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液在温度25～35℃的条件下进行的。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在步骤D中，在催化剂PyBOP的存在下，在温度25～35℃的条件下，按照全保护肽、PyBOP与NH₂Et.HCl的摩尔比1:1.4～1.6：1.4～1.6，让步骤C得到的全保护肽与乙胺盐酸盐进行乙胺化。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述的氢化是在钯碳催化剂存在与5～10大气压的条件下，按照所述中间体、钯碳催化剂与甲酸铵的质量比1:0.8～1.2：0.8～1.2，使用甲酸铵供氢体通过氢化还原或氢转移反应脱除所述的中间体Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr(Bzl)-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(NO₂)-Pro-NHEt中的精氨酸侧链硝基和酪氨酸侧链苄基。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述脱保护是Pyr-His(Trt)-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt在含有间甲酚的三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液里，在温度25～35℃条件下裂解0.5～2小时，选择脱去组氨酸侧链三苯甲基，而保留D-丝氨酸叔丁基，得到Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt，其中三氟乙酸：间甲酚(m-Cresol)：二氯甲烷的体积比12～18：4～6：76～84。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述纯化是Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHEt采用HPLC在常规条件下进行纯化，得到高纯度的布舍瑞林Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-OH，其纯度为纯度为95～98％，收率为25～31％。