[发明专利]一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒，其特征是：所述的检测试剂盒包含用于检测APOE基因rs7259620单核苷酸多态性的APOE基因引物和用于检测APOA5基因rs662799单核苷酸多态性的APOA5基因引物；

所述的APOE基因引物为包括以下序列的核苷酸片段：

APOE基因特异性上游引物一：5’-gcgggcagggcggcTCACTGTGTGGTTTTGCCATTCg-3’；

APOE基因特异性上游引物二：5’-gcgggcTCACTGTGTGGTTTTGCCATTCa-3’；

APOE基因反向测序引物：5’-AACCCGTGGTTCAGCAGCAAGA-3’；

所述的APOA5基因引物为包括以下序列的核苷酸片段：

APOA5基因特异性上游引物一：5’-gcgggcagggcggcCCAGGAACTGGAGCGAAAGTg-3’；

APOA5基因特异性上游引物二：5’-gcgggcCCAGGAACTGGAGCGAAAGTa-3’；

APOA5基因反向测序引物：5’-CCCTGCGAGTGGAGTTAGCTT-3’。

2.根据权利要求1所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒，其特征是：所述的APOE基因引物为：

APOE基因特异性上游引物一：5’-gcgggcagggcggcTCACTGTGTGGTTTTGCCATTCg-3’；

APOE基因特异性上游引物二：5’-gcgggcTCACTGTGTGGTTTTGCCATTCa-3’；

APOE基因反向测序引物：5’-AACCCGTGGTTCAGCAGCAAGA-3’。

3.根据权利要求1所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒，其特征是：所述的APOA5基因引物为：

APOA5基因特异性上游引物一：5’-gcgggcagggcggcCCAGGAACTGGAGCGAAAGTg-3’；

APOA5基因特异性上游引物二：5’-gcgggcCCAGGAACTGGAGCGAAAGTa-3’；

APOA5基因反向测序引物：5’-CCCTGCGAGTGGAGTTAGCTT-3’。

4.根据权利要求1所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒的检测方法：其特征是：包括以下步骤：

步骤一：对标准样品进行PCR扩增建立标准熔解曲线；

步骤二：用检测试剂盒的APOE基因引物和APOA5基因对样品DNA进行PCR扩增；

步骤三：将步骤二中的PCR扩增产物用荧光定量PCR仪分析熔解曲线，并与步骤一中建立的标准熔解曲线进行比较，对比PCR扩增产物的Tm值，获得相应的基因分型结果。

5.根据权利要求4所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒的检测方法：其特征是：所述的步骤二中的APOE基因引物的PCR扩增程序为：95℃初始变性阶段30s；接着循环进行95℃变性30s，56℃复性30s，72℃延伸30s，共40个循环；最后72℃延伸5min。

6.根据权利要求5所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒的检测方法：其特征是：所述的步骤三中APOE基因引物的PCR扩增产物熔解曲线的分析方法为：将APOE基因引物的PCR扩增产物置于荧光定量PCR仪中，95℃变性15s，60℃复性30s，再以0.11℃/s的速度上升到95℃，期间连续采集荧光信号，40℃维持；根据荧光强度进行聚类分析获得熔解曲线数据。

7.根据权利要求6所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒的检测方法：其特征是：所述的步骤三中APOE基因引物的PCR扩增产物熔解曲线中，熔解温度77±0.5℃的为AA型，熔解温度82±0.5℃的为GG型，熔解温度77±0.5℃和82±0.5℃的为AG型。

8.根据权利要求4所述的一种辅助诊断冠心病的检测试剂盒的检测方法：其特征是：所述的步骤二中的APOA5基因引物的PCR扩增程序为：所述PCR扩增的扩增程序为：95℃初始变性阶段30s；接着循环进行95℃变性30s，59℃复性30s，72℃延伸30s，共40个循环；最后72℃延伸5min。