[发明专利]一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法

说明书

技术领域

本发明属于植物资源的综合开发技术领域，涉及采用现代分析检测仪器检测植物、蔬菜化学成分的检测方法，更具体的说是一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法。

背景技术

苦瓜（Momordica Charantia L）又名锦荔枝、癞葡萄、癞瓜、凉瓜等，系葫芦科苦瓜属蔓性草本植物，据《滇南本草》、《本草纲目》记载，苦瓜叶片具有治胃痛、痢疾、疗疮肿毒、驱虫等功效，通过田间调查和实验证实苦瓜叶及其提取物还具有较强抗虫性，K. Prabakar等对苦瓜、蛇瓜、丝瓜、冬瓜和西瓜这五种葫芦科植物叶片的甲醇提取物对致倦库蚊（Celux quinquefasciatus）幼虫杀虫活性进行了研究，结果表明苦瓜叶甲醇提取物对致倦库蚊的杀虫活性最大，其LC₅₀值为465.85ppm，低于其它四种葫芦科植物。陈宏等采用乙醚、丙酮、乙醇、石油醚4种有机溶剂浸提和热提苦瓜叶片，以提取液涂抹桑叶和甘蓝叶分别饲喂家蚕和菜青虫，试验结果表明：4种有机溶剂提取液处理试虫，其取食量降低，生长速率缓慢，存活率下降，其中以乙醚提取液的作用效果最强。除叶片浸提产物外，叶片挥发性物质对昆虫也有一定的拒食性，但关于此方面研究至今未见相关的文献报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法。本文通过气相色谱-质谱-计算机联用系统对苦瓜叶挥发组分作了一个系统的分析，试图揭示苦瓜叶抗虫作用的化学本质，为苦瓜叶片抗虫作用的进一步研究提供参考，并为苦瓜叶作为一种植物资源的综合开发提供科学依据。为实现此目的，本发明内容提供如下的技术内容：

    一种苦瓜叶挥发性杀虫组分的检测方法，其特征在于包括如下的步骤：

（1）苦瓜叶挥发性组分：

将新鲜苦瓜叶用去离子水冲洗干净，置于阴凉洁净处晾去表面水分，称取500g捣碎，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2 h，溜出液速度为80-100滴/min。蒸馏液用100mL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物经旋转蒸发仪浓缩至5 mL，得到淡黄色油状提取物，备用；

（2）采用GC-MS进行分析，气相色谱条件：柱子初始温度40℃保持3min，以5℃/min升至180℃保持2min，再以10℃/min升至280℃，保持2min，进样口温度：250℃，质谱连接线温度：250℃，高纯氦气为载气，流速1.0ml/min，分流比：10:1，进样量：1.0μL；质谱条件：质谱电离方式为EI，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度230℃，电子倍增器电压1.0×10⁵，溶剂延迟时间：3min，扫描范围m/z:35-1000aum；

（3）利用峰面积归一化法计算各峰面积的相对含量，从苦瓜叶挥发性组分中分析鉴定出14种化合物，主要成分有16.21% (Z)-牻牛儿醇醋酸酯，16.21%6-亚异丙基-1-甲基二环[3.1.0]己烷，0.92%N,N-二甲基-2-苯乙胺。

本发明具更加体的试验方法如下：

   1、材料与方法

    1.1仪器和试剂

GC-MS联用仪(Thermo，Focus GC，DSQ II，美国)

TR-5MS色谱柱（30m×25mm×0.25μm），NIST05标准谱图库

氯仿，丙酮、二氯甲烷、无水硫酸钠和氢氧化钠均为分析纯（天津市元立化工有限公司）

苦瓜叶采自天津市郊区，经鉴定为葫芦目葫芦科苦瓜属长丰三号苦瓜的叶片，用去离子水洗净后烘干备用。

    1.2分析样品的制备

采用同时蒸馏法。将新鲜苦瓜叶用去离子水冲洗干净，置于阴凉洁净处晾去表面水分，称取500g捣碎，进行水蒸气蒸馏，蒸馏时间2 h，溜出液速度为80-100滴/min。蒸馏液用100mL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物经旋转蒸发仪浓缩至5 mL，得到淡黄色油状提取物作GC-MS分析。

    1.3GC-MS分析条件

气相色谱条件：柱子初始温度40℃保持3min，以5℃/min升至180℃保持2min，再以10℃/min升至280℃，保持2min，进样口温度：250℃，质谱连接线温度：250℃，高纯氦气为载气，流速1.0ml/min，分流比：10:1，进样量：1.0μL；

质谱条件：质谱电离方式为EI，电子轰击源电子能量70eV，离子源温度230℃，电子倍增器电压1.0×10⁵，溶剂延迟时间：3min，扫描范围m/z:35-1000aum。