[发明专利]一种苹果绵蚜蜡腺孔观察方法

权利要求书

1.一种苹果绵蚜蜡腺孔观察方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）样本采集：于5～6月份苹果绵蚜危害期，选剪带有苹果绵蚜的枝条，剪下苹果叶仅留有叶柄，将处理好的苹果枝插入装有三分之二水的1000mL烧杯中，用纱布把烧杯口封住，放于阴凉通风处备用；

（2）苹果绵蚜初处理：选取一个苹果绵蚜虫落，将覆盖在虫落上的绵絮去掉，用毛笔将虫落扫至培养皿中于解剖镜下分辩龄期，用体积浓度为70-90%酒精反复冲洗苹果绵蚜3次，然后将各龄期苹果绵蚜分别放入指形管中，用体积浓度为70-80%酒精浸渍24小时以上待用；

（3）苹果绵蚜脱脂处理：将步骤2中不同龄期的苹果绵蚜从指形管中取出，用昆虫针在其腹部扎一小孔后于体积浓度为70-80%酒精中浸泡24-48h后冲洗干净，再于质量浓度为8-15%的氢氧化钠溶液中恒温静置至虫体发白透明，蒸馏水清洗后再次在腹部扎另一小孔，于体积浓度为70-80%酒精溶液中再次静置至虫体透明；

（4）苹果绵蚜玻片标本的制作：取步骤3中透明的虫体放于凹玻片上，用蒸馏水冲洗3-5次，吸水纸将水吸净后用染色剂染色5-15分钟，再用蒸馏水将染色剂冲洗干净；虫体经整姿、干燥静置、压片、去泡透明后放于标本盒中待用；

（5）玻片标本观察及数据处理：挑选1 -4龄若蚜、成蚜玻片标本各5枚，于双目实体显微镜下观察其蜡腺孔和小孔的数目及其分布规律，记录数据，实验数据用Excel进行处理并利用SPSS17.0统计学软件对实验数据进行多重比较。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述的清洗苹果绵蚜用的酒精浓度为75%；所述的浸泡酒精的浓度为75%，浸泡时间为24-48h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中，所述的毛笔为小号、软毛毛笔；步骤3中，所述的昆虫针为零号昆虫针。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3所述的脱脂处理过程包括以下步骤：  

（a）将已分好龄期的苹果绵蚜从指形管中取出，用零号昆虫针在其腹部扎一小孔，然后再放到盛有75%酒精溶液的指形管中静置24-48h备用；

（b）浸泡结束后，将苹果绵蚜从酒精溶液中取出，并用蒸馏水在培养皿中冲洗2-3次；

（c）将苹果绵蚜分龄期浸泡于浓度为10%的氢氧化钠溶液中，并置于37℃的恒温箱中放置36-48h至虫体发白透明；

（d）将苹果绵蚜从氢氧化钠溶液中取出，用蒸馏水清洗3次，并再次用零号昆虫针在其腹部扎另一小孔；然后将苹果绵蚜按龄期转移到装有75%酒精溶液的指形管中，再次静置至透明为止。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4中所述的标本制作过程包括以下步骤：

（a）清洗：从指形管中取出已脱脂较好即虫体透明的苹果绵蚜，放于凹玻片上，用蒸馏水冲洗3-5次将酒精溶液漂洗干净；

（b）染色：将苹果绵蚜放到凹载玻片上，用吸水纸将水吸净，使用染色剂染色5-15分钟后，用蒸馏水将染色剂冲洗干净；

（c）整姿：用吸管吸取一头已染色的苹果绵蚜，将其放置到载玻片上，并加一滴蒸馏水，然后将玻片放到双目实体解剖镜下，用零号昆虫针对虫体整姿；

（d）干燥：用吸水纸沿虫体整姿方向将水吸干，再将虫体静置5min；

（e）压片：用霍氏封固剂制作压片；

（f）去泡透明：将制好的玻片放于酒精灯外焰处，加热约30-50秒，烘干至霍氏封固剂凝固并将玻片中的气泡赶走；

（g）放置标本盒内保存待用：先将玻片平放，待封固剂完全干了之后再插入标本盒中。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，步骤b中，所述的染色剂为亮绿，质量浓度为0.5%，染色时间为10分钟。