[发明专利]一种多重PCR在败血症真菌检测中的应用在审

申请号：	201410156827.1	申请日：	2014-04-18
公开（公告）号：	CN105018575A	公开（公告）日：	2015-11-04
发明（设计）人：	胡东;张荣波;吴静;陈兆权;刑应如;杨小康;何江;王婉;戴京京	申请（专利权）人：	安徽理工大学
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/72;C12R1/725;C12R1/74;C12R1/845;C12R1/68;C12R1/66;C12R1/67;C12R1/685;C12R1/77;C12R1/645
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	232001 ***	国省代码：	安徽;34
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摘要：
搜索关键词：	一种多重 pcr 败血症真菌检测中的应用
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【说明书】：

技术领域

本发明设计分子生物学技术领域，具体涉及一种多重PCR体系对真菌性败血症进行快速诊断的方法。多重PCR技术，适用于感染性疾病、肿瘤、遗传病的检测。

背景技术

目前对真菌性败血症快速准确诊断，尚缺乏可靠的检测方法，早期快速诊断，对于真菌性败血症的治疗、预后及耐药性预防，都具有重要意义。在普通外科的病人中血液真菌感染病人病死率高达27％～64％。外科危重病人一旦罹患真菌感染，病死率明显上升。念珠菌败血症在医院感染败血症中居第4位，病死率更是高居首位。真菌性败血症的高死亡率是因为其起病急，后果严重，临床诊断比较困难。该病症常无特异症状和体征, 与细菌感染不易区分,易漏诊或误诊为细菌感染而尝试性地使用广谱抗生素，反而易于导致菌群失调加重病情。

真核生物基因组中编码核糖体的基因包括28S rDNA、5S rDNA、18S rDNA和5.8S rDNA 4种，它们在染色体上头尾相连、串联排列，相互之间由间隔区分隔。其中18S、5.8S和28S rDNA基因组成一个转录单元，三者高度保守。其间的间隔区为内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer，ITS)，包括ITSI及ITS2两部分，其进化相对迅速而具多态性。本技术基于rDNA—ITS基因多态性的序列分析，选取真菌的rRNA及转录间区片段作为PCR目的基因，以保守序列设计待测真菌的上游通用引物(5’-GCATCGATGAAGAACG-3’)，以高变区设计下游特异性引物，既减少了所需引物的数量，又保证了检测的高度特异性。

发明内容

本发明的目的是提供一种多重PCR体系对真菌性败血症进行快速诊断的方法。

本发明设计了一种多重PCR体系，该体系能够弥补已有真菌检测方法的不足，为发病急、死亡率高的真菌性败血症及脓毒症临床治疗提供明确的用药信息，从而赢得宝贵的治疗时间。

本发明提供了一种多重PCR技术，其特征在于能够快速、准确、高效的检测真菌，技术简便，易于操作和推广，有着非常广阔的应用空间。

本发明所采用的技术方案的主要内容是：

一种真菌多重PCR检测方法，主要包括以下序列：

体系一：

白假丝酵母：上游引物：5’- GCATCGATGAAGAACG -3’