[发明专利]古尼拟青霉提取物的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及古尼拟青霉提取物的制备方法，属于生物制品的提取制备技术领域。

背景技术

古尼拟青霉（Paecilomyces gunnii）为麦角菌科(Clavicipitaceae)虫草属（Cordyceps）的真菌；其所含活性物质与冬虫夏草等虫草子实体相似，具有重要经济价值。拟青霉酮是从一种拟青霉(Paecilomyces sp.) 培养物中分离制备得到的具有抑制酪氨酸酶活性和清除自由基活性的生物活性物质。酪氨酸酶兼有加氧酶和氧化酶的双重功能，在黑色素合成过程中起关键作用。它能够把单酚催化成二酚，并把二酚氧化成醌；醌在非酶促条件下形成最终的反应产物黑色素。具有抑制酪氨酸酶活性的生物活性物质可通过抑制酪氨酸酶活性而抑制黑色素生成，因而可用来预防和治疗色素沉着和黑色素瘤等，在医药和日用化学品等领域有着广阔的应用前景。自由基（free radical），从化学结构上看是指含未配对电子的基团、原子或分子。自由基具有高度化学活性。对于生命体来说，自由基是生命活动中多种生化反应的中间产物。在正常情况下，人体内的自由基是处于产生与清除的动态平衡之中。自由基是机体有效的防御系统，如不能维持一定水平的自由基则会对机体生命活动带来不利影响。但自由基产生过多或清除过慢，它通过攻击生命大分子物质及各种细胞器，会造成机体分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病。最新的研究表明，人类的衰老及许多疾病都与自由基损伤有关。具有清除自由基活性的物质能与自由基反应并使之还原成非自由基化合物，可清除机体代谢过程中产生的过多的自由基，是一种可增进人体健康的重要活性物质。自由基清除剂在非生命体系中有抗氧化作用，能够有效地阻止物质的氧化败坏，对于延长物品的保质期有着重要作用，被广泛用于食品、药品、日用化学品等中。古尼拟青霉（Paecilomyces gunnii）现虽已有多种生产方法，但是大多生产周期较长，成本较高，不能满足规模需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种生产周期短、资源利用率高的古尼拟青霉提取物的制备方法。

本发明的古尼拟青霉提取物的制备方法，包括液体菌种发酵步骤、固体发酵步骤和发酵培养物的提取步骤；所述液体菌种发酵包括一级种子罐发酵和二级种子罐发酵；所述固体发酵为将灭菌后的固体培养基与经液体发酵菌种混合培养，干燥，粉碎。

所述一级种子罐发酵是指：在50L气升式发酵罐中装入约35L液体培养基， 121℃～126℃灭菌30分钟；灭菌后，冷却至23℃时接种，培养温度为23℃，通气量为1：1 V/V·min，保压0.05～0.1MPa，经24h通气培养，达到对数生长期后即可；

所述二级种子罐发酵是指：在500L种子罐中装入350L液体培养基，121℃～126℃灭菌30分钟；灭菌后，冷却至23℃，将一级种子罐所得的液体种子全部接入二级种子罐培养，培养温度23℃，通气量为1：1 V/V·min，保压0.05～0.1MPa，经过24h通气培养，达到对数生长期后即可；

所述固体发酵是向固体培养基加入固体培养基质量40%～60%的水，拌匀后灭菌；将灭菌后的固体培养基于无菌通风室中冷却至25-30℃，以接种量25%～50%接入经二级种子罐发酵后的液体菌种；将接种后的物料平铺在带孔浅盘中放入培养室中培养；培养72小时后出料、烘干、粉碎即得成品。

所述一级种子罐发酵和二级种子罐发酵所用液体培养基中包括下述质量配比的原料：黄豆粉3%、白砂糖3%、玉米粉1%、酵母粉1%、酵母浸出粉1%、蚕蛹粉0.5%、MgSO₄0.05%、KH₂PO₄0.05%、消泡剂0.05%、水余量。

所述液体培养基用碱调pH值为6-7为佳。

所述固体培养基原料质量配比优选为：玉米粉65%、豆粕25%、麸皮10%。

所述固体发酵时，培养72小时出料、烘干、粉碎后，过300目筛为佳。