[发明专利]一种高通量筛选CYP450酶抑制药物的试剂盒及其研究方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高通量筛选CYP450酶抑制药物的试剂盒及其研究方法，属于药物安全评价领域。 

背景技术

细胞色素P450(CYP450)属于一种血红蛋白类酶，广泛存在于生物体，是微粒体混合功能氧化酶系中最重要的一族氧化酶，分布在多种组织，器官，相对分子质量50kDa，在波长450nm处有最大吸收峰。它参与的生化反应有脂肪酸、固醇类生物合成和类固醇激素等内源性底物的氧化代谢、外源物和大部分药物的生物氧化等；它使进入机体的外源物经代谢后向两个方向发展：代谢活化和代谢解毒，代谢活化后的产物有较强的毒性，甚至产生致畸、致癌效应。 

细胞色素P450作为和药物代谢相关的重要酶类，在药物代谢中起着相当重要的作用，对其代谢的研究将有助于新药的开发，并能帮助人们更加清楚的认识药物的代谢途径，减少新药在人体内的副作用，增加药物疗效。医药机构已经证明导致死亡的主要原因就是不良药物相互作用，当两种或更多药物联合使用时，改变其中一个药物的效应或毒性导致发生不良药物相互作用。美国的一项研究表明，住院患者的严重不良反应发生率为6.7%，因药物相互作用的致死率已排名住院患者死亡原因的第4-5位，近20年内，美国FDA先后将已批准上市的13种新药从市场撤出，其最主要的原因就是出现了严重的药物代谢性相互作用。所以，如果一个药物对细胞色素P450产生抑制，在联合用药的过程中，就会导致细胞色素P450对另一药物的代谢受阻，从而产生毒性，危害身体，这就是严重的药物代谢的相互作用之一，因而在前期研发过程中，研究化合物对细胞色素P450是否有抑制相当重要，对于药物的临床应用有重要的意义。 

由于组合化学的出现和和快速发展，使得合成大量有潜在临床治疗功能的化合物速度也大为提高了。然而评估这些化合物缺乏相应的快速检测试剂 盒和技术支持，使科研人员需要自制或自配相关试剂和微粒体，酶抑制的研究方法也不统一和规范，有对单个酶的，也有对多个酶的，所有这些对于没有经过药物代谢研究培训的医务人员，开展相关药物相互作用评价工作会很难，即使做了也经常浪费大量人力、物力和时间之后，却会因试剂配制不正确、操作不规范，计算不专业等原因导致无法获得准确的药物相互作用的信息，从而低估药物在临床应用时的相互作用风险，潜在危害较大。而且国内外的酶活性检测试剂盒主要是对单个酶活性影响的检测，而且通常使用荧光定量、HPLC检测或ELISA检测试剂盒，检测灵敏度低，误差较大，操作复杂，而且远不能满足高通量快速筛选的要求，对于评价药物临床相互作用的风险数据不全面，不能模拟真正人体用药之后整体的情况，因此本领域特别需要有一套全面评价药物相互作用的试剂盒和技术方法，能够快速简单评价药物相互作用的风险，特别能够满足没有相关代谢专业基础的科研工作者的药物评价的需要，根据试剂盒说明书操作即可完成评价任务。 

发明内容

本发明的目的是提供一种高通量筛选CYP450酶抑制药物的试剂盒及其研究方法，试剂盒提供包装盒及完整的试剂搭配，能够利用试剂盒的使用说明书快速而准确的进行药物相互作用研究，利用高通量的LC-MS/MS检测技术检测各代谢产物的量，计算IC₅₀值，评价药物对各CYP450酶抑制作用。本检测试剂盒及其研究方法主要是为药物早期筛选和临床用药相互作用研究提供技术支持，特别是为那些刚接触药物代谢研究的科研工作者，临床医务工作者提供了药物评价的物质和技术支持，将可大大缩短研究时间，提高工作效率，推动我国在临床用药领域的研发工作，对于提高人们的生活质量，推动医学模式、治疗方式及用药结构改革起到巨大的推动作用。 

为了解决现有试剂盒和技术研究所存在的问题，本发明是采用以下技术方案：根据试剂盒说明书配制NADPH再生系统，通过将不同浓度药物、混合底物和肝微粒体共同孵育后，利用LC-MS/MS同时检测FDA推荐的六个代谢产物，IC₅₀值的计算根据GraphPad Prism 5 Project软件进行。IC₅₀>50μmol/L说明药物对CYP450酶无抑制作用，无药物相互作用的风险，10<IC₅₀<50μmol/L说明药物是弱抑制剂，药物相互作用的风险较小，1<IC₅₀<10μmol/L说明药物是中等抑制剂，IC₅₀<1μmol/L说明药物是强抑制剂， 中等和强抑制剂具有药物相互作用的风险，需要进一步研究和关注。. 

技术方案具体实施：