[发明专利]一种叶酸受体靶向的敲除DNMT1基因的药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种叶酸受体靶向敲除DNMT1的药物组合物及其制备方法和用途。 

背景技术

癌症是当今世界各国面临的一个主要的公共健康难题。在发达国家，癌症是人口死亡的首要原因；而在发展中国家，癌症也是引起人口死亡的第二位原因。据最新癌症统计学数据，全球癌症患者每年新发病例1266万，死亡病例756万。在发达国家如美国，每年癌症新发病例约166万，因癌症死亡约58万，每4人中就有1人死于癌症。据《2012中国肿瘤登记年报》，我国每年新发癌症病例约350万，因癌症死亡约250万，全国每6分钟就有1人被确证为癌症，每天有8550人成为癌症患者，每7到8人中就有1人死于癌症。 

虽然在过去的近20～30年间，传统治疗手段包括放射治疗、化学治疗和手术治疗不断发展，但是新的治疗药物以及新技术的应用依旧未能改进癌症患者生存质量和存活率。因此，新的治疗手段——基因治疗——的开发可能改变癌症的治疗现状。截止目前，肿瘤基因治疗临床试验已开展近20年，仍在开放的临床试验829例，占整个基因治疗临床试验的66.85%（829/1240）。 

表观遗传改变例如DNA甲基化涉及多种癌症的发生和进展。DNA甲基化反应是由DNA甲基化转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）催化，在DNA的某个碱基上增加一个甲基；DNA甲基化仅影响DNA链上鸟嘌呤前的胞嘧啶（CpG）。基因组中某些区域CpG比较聚集（密度比较高），这些区域常见于基因的启动子、第一个外显子和基因的3’-末端，这些区域被称之为CpG岛。在正常细胞，大多数CpG岛完全无甲基化。研究发现，肿瘤细胞中的抑癌基因启动子区域CpG岛过度甲基化，导致抑癌基因不表达，与肿瘤的发生、发展密切相关。目前发现的DNMT主要包括DNMT1、DNMT2、DNMT3a和DNMT3b，其中DNMT1在哺乳动物中的含量最高，是调节DNA甲基化最重要的酶，主要参与维持性甲基化，可以在甲基化的DNA模板指导下使新合成的DNA链发生甲基化。已经证明在卵巢癌、乳腺癌、胰腺癌、肝癌、宫颈癌、白血病等多种人恶性肿瘤中DNMT1的表达增高,并且通过DNMT1介导的基因失活促进肿瘤进展。因此，研究调控肿瘤DNMT1的策略已成为近年肿瘤治疗的热点和趋势。目前已有靶向DNMT1的小分子抑制如5-氮杂胞苷和地西他滨应用于临床治疗骨髓增生异常综合征。虽然这些小分子抑制剂在临床治疗中取得了一定疗效，但治疗过程中选择性差，毒性大及仅对小部分患者有效等问题促使需要开发疗效更确切的基因治疗药物。 

目前，基因编辑技术的迅速发展为基因治疗带来前所未有的机遇。其中Talen和cas9技术因制备简单、效率高，已成为基因编辑的首选方案。相比RNA干扰的瞬时效应，基因编辑技术可以稳定地导致基因失活，因而理论上该技术有广阔的应用前景。然而，将该技术应用于临床治疗、尤其是肿瘤治疗还罕见报道。其中一个重要的瓶颈是缺乏高效、特异的靶向传输系统。 

文献报道，多种上皮来源的肿瘤包括卵巢癌、肾癌、前列腺癌、乳腺癌、胃癌、宫颈癌、脑癌、肺癌、头颈部癌以及结直肠癌等都有叶酸受体的高表达。利用可靶向肿瘤细胞表面高表达的叶酸受体成分投递药物，可以实现肿瘤选择性的靶向给药，提高药物的抗肿瘤效果。 

发明人拟构建一种叶酸受体靶向的敲除DNMT1 基因的药物组合物，利用可靶向肿瘤细胞表面高表达的叶酸受体成分，将敲除DNMT1基因的Talen或cas9载体投递到肿瘤部位，提高DNMT1的敲除效率，使其具有较好的抗肿瘤效果。 

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种叶酸受体靶向的敲除DNMT1基因的药物组合物，目的在于提高DNMT1的敲除效率，从而提高抗肿瘤效果。 

该药物组合物含有叶酸受体靶向成分和敲除DNMT1基因表达的Talen和cas9载体，可添加其他药学上可接受的成分，也可不添加其他成分。 

该药物组合物中的叶酸受体靶向成分包括但不限于叶酸受体的抗体、叶酸、叶酸衍生物、甲氨蝶呤、甲氨蝶呤衍生物。其中，叶酸受体的抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体和人源化抗体中的一种或多种，例如：Farletuzumab（MORAb-003）或其他公开的叶酸受体的抗体；叶酸衍生物包括但不限于四氢叶酸、5-甲基四氢叶酸、5,10-亚甲基四氢叶酸、5-甲酰四氢叶酸、10-甲酰四氢叶酸、5,10-二脱氮四氢叶酸中的一种或多种。