[发明专利]花鲈精液的处理方法

说明书

技术领域

本发明涉及鱼类遗传技术领域，尤其涉及一种花鲈精液的处理方法。

背景技术

花鲈属鲈形目，鮨科，花鲈属。俗称：鲈鱼、海鲈，又称日本真鲈。其个体大，肉质佳美，适应性强，生长快、食性广，蛋白质、钙、磷、铁、维生素、烟酸、微量维生素B1等营养物质含量丰富，是我国名贵的海水肉食性养殖鱼类，广泛分布于渤海、黄海、东海，日本及朝鲜半岛海域，为太平洋西北沿海特有物种。自20世纪90年代以来，经过近20多年的发展，我国花鲈养殖产量达到9万多吨，位列海水养殖鱼类之首。但是花鲈养殖业也面临着空前的挑战，主要问题有：种质退化、病害增多、养殖成本上升等。花鲈种质质量最好的野生花鲈种群数量锐减，亲鱼繁殖性能不断退化，花鲈遗传育种与繁殖等基础研究薄弱，关键技术未得到应有的重视，严重影响了花鲈养殖业可持续发展。

现阶段花鲈的自然繁育由于雌雄个体产生配子时间短，雌雄亲鱼性成熟不同步，可能导致无法受精；人工繁育所需要的精液采用人工腹部挤压法取得，花鲈精液在离开精巢后，由于没有采取任何处理措施，使得花鲈精液的活力下降快，不能长时间保存，无法进行长距离运输，受时间和空间地域的限制，精子质量会随着累代积累下降，优良基因会因杂交而丧失。

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术存在的缺陷，提供一种花鲈精液的处理方法。

一种花鲈精液的处理方法，包括以下步骤：

（1）将花鲈精液与抗冻液按体积比1：3比例稀释混匀；

（2）预冷处理，将稀释后的混合液在4℃预冷3分钟；

（3）预冷后以分段方式降温处理；

（4）分装保存；

其中，步骤1中所述抗冻液由稀释液、抗冻剂和添加剂组成；其中，稀释液为NaCl溶液：8.775g/L；抗冻保护剂的浓度为20%；添加剂为牛血清白蛋白：10g/L，葡萄糖：10g/L，土霉素：1g/L；

步骤3中，所述分段方式降温处理包括：首先将预冷处理后的混合液在液氮罐液面以上10cm停留5分钟，然后在液氮罐液面以上4cm停留5分钟，最后在液氮罐液面以上1cm停留3分钟后直接陷入液氮中长期保存。

进一步地，如上所述的花鲈精液的处理方法，在步骤4之后，还包括解冻步骤5，即将经液氮处理分装保存的花鲈冻精直接放入37℃水浴解冻50-60秒，期间不断摇动花鲈冻精，然后置于室温至完全融化，而后于自然海水中激活。

进一步地，如上所述的花鲈精液的处理方法，所述激活包括将解冻后的冻精置入经煮沸消毒并加有5%牛血清白蛋白的自然海水中进行激活。

进一步地，如上所述所述的花鲈精液的处理方法，在步骤1之前，还包括花鲈精液的获取，包括以下步骤：

（1）选取3-4龄，体重3-4kg的雄性花鲈亲鱼进行麻醉；

（2）按1000U/kg的量肌肉注射HCG；

（3）三天后采用腹部挤压法获得精液，取活力95%以上的花鲈精液。

进一步地，如上所述所述的花鲈精液的处理方法，所述抗冻保护剂为二甲亚砜。

进一步地，如上所述所述的花鲈精液的处理方法，步骤1中将花鲈精液与抗冻液按体积比1：3比例稀释混匀后，封装于冻存管中，所述冻存管为2ml的冻存管。

进一步地，如上所述所述的花鲈精液的处理方法，所述分段方式降温处理包括采用程序降温仪程序降温。

本发明提供的花鲈精液的处理方法，通过在花鲈繁殖期将其精液冷冻保存起来，随时随地解冻复温获得活力较高的精液，解决了雄性花鲈亲鱼产精时间短、产精量少的困难，解决了花鲈雌雄个体性成熟不同步的问题，解决了花鲈精子无法长距离、长时间运输的困难；保存的花鲈精子，可以随时随地为异源雌核诱导育种提供材料，有利于花鲈的可持续养殖，有利于花鲈遗传多样性的保护，有利于花鲈品系的选育；在花鲈的繁殖、遗传育种以及种质资源保存中具有重要的意义。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例：

本发明提供的花鲈精液的处理方法，包括以下步骤：