[发明专利]利用电化学发光法检测治疗性抗体类药物的细胞结合活性的方法

权利要求书

1.一种利用电化学发光法检测治疗性抗体类药物的细胞结合活性的放行检测方法，其特征在于，包括步骤：

1)将细胞铺于96孔板中，孵育1～2h；

2)加入封闭液，孵育30min～1h进行封闭；

其中，封闭液是含体积浓度为10％～30％胎牛血清的缓冲液；

3)缓冲液清洗后，加入治疗性抗体类药物，孵育1～2h；

4)缓冲液清洗后，加入钌标记的抗人IgG，孵育1～1.5h；

5)缓冲液清洗后，加入无表面活性剂的MSD read缓冲液；

6)用MSD Sector Imager6000读96孔板，得到细胞结合活性结果；

所述步骤6)中，细胞结合活性的评价标准是以相对活性进行评价，该相对活性的计算公式如下：

其中，测得的活力是指MSD Sector Imager6000所测量得到的结果，预期的活力是通过紫外分光光度法检测UV280nm所测得的抗体浓度，并且相对活性为70％～130％则说明治疗性抗体类药物的生物学效力符合可接受标准。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)中，细胞包括：Raji、WIL2-S或DS-1细胞；

96孔板包括：MSD公司的Single-SPOT 96孔板；

96孔板中的细胞密度为2×10³个/孔～2×10⁶个/孔，96孔板中的细胞悬液为25μL/孔～50μL/孔。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，封闭液为含体积浓度为10％～30％FBS的1×PBS缓冲液；

封闭液的用量为40μL/孔～60μL/孔。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)、4)和5)中，缓冲液清洗中的缓冲液包括：1×PBS缓冲液。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于：所述步骤3)、4)和5)中，缓冲液清洗中的缓冲液的pH为7.1～7.3；清洗的次数为3次。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤3)中，治疗性抗体类药物包括：单克隆抗体药物；

治疗性抗体类药物的加入量为40μL/孔～60μL/孔，加入浓度范围为20μg治疗性抗体/mL～0.05ng治疗性抗体/mL。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于：所述单克隆抗体的大小为140～160KD。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤4)中，钌标记的抗人IgG是MSD公司的钌标记的抗人IgG，其用量为40μL/孔～60μL/孔。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤5)中，无表面活性剂的MSD read缓冲液是MSD公司的产品，其用量为150μL/孔～200μL/孔。