[发明专利]α‑淀粉酶的检测试剂和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种检测试剂和检测方法，具体涉及一种α-淀粉酶的检测试剂和利用便携式血糖仪或其它葡萄糖检测仪快速定量检测α-淀粉酶的方法。

背景技术

α-淀粉酶（α-1,4-D-葡萄糖-葡萄糖苷水解酶）能切断淀粉、糖原、寡聚或多聚糖分子内的α-1,4 葡萄糖苷键，产生麦芽糖、低聚糖和葡萄糖等。α-淀粉酶由唾液腺和胰腺内具有分泌功能的上皮细胞合成。流行性腮腺炎，特别是急性胰腺炎时，血和尿中的α-淀粉酶浓度显著增高。一些急腹症，如急性阑尾炎、肠梗阻、胰腺癌、溃疡病穿孔等均可引起血清α-淀粉酶升高，因此α-淀粉酶的检测具有重要的临床意义。

传统的用于α-淀粉酶测定的方法主要有：（1）以天然淀粉为底物的测定方法。以天然淀粉为底物时，由于天然淀粉分子结构组成的不确定性及酶解产物的不均一性，使酶促反应不能按化学式量进行计算。应用不同来源、厂家、批号的淀粉作为底物时，测得结果差别较大，方法不易标准化。目前除碘-淀粉法外，这类方法已被淘汰。（2）使用结构确定的人工合成底物进行α-淀粉酶测定的酶偶联分析方法。这类方法可以改进酶反应的化学计量关系，在加入不同工具酶后进行多步水解过程，通过测定水解终产物的吸光度值来计算α-淀粉酶的浓度。这些底物有小分子寡聚糖（含3～7个葡萄糖单位）和对-硝基苯酚-糖苷等。其中麦芽戊糖和麦芽四糖是常用的的反应底物，试剂稳定，水解产物确定，化学计量关系明确。

但是，这些传统的检测α-淀粉酶的方法需要大型的昂贵仪器，如大型全自动生化仪，通过测定水解终产物的吸光度值来计算α-淀粉酶的浓度。由于大型全自动生化仪设备价格高，操作复杂，操作人员需要相关专业知识和培训，并且该仪器使用配套条件要求高，需要专业人员定期保养，因此基层医疗机构或家庭个人没有条件购买和使用。如果我们能够利用低成本的、操作简单的便携式检测仪器，例如已经商业化的便携式血糖仪，在无需专业技术人员协助情况下就可以方便个人在家中对α-淀粉酶进行快速地检测，这对于低收入人群或不发达国家中的人们来说将具有重大意义。因此，发展一种快速的，低成本的，简单易行的α-淀粉酶检测方法将具有非常重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种可快速定量检测α-淀粉酶的检测试剂，还提供一种操作简便、快速、所用仪器可便携、灵敏度高、选择性好、且无需专业培训即可快速对α-淀粉酶进行检测的α-淀粉酶的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为一种α-淀粉酶的检测试剂，所述检测试剂包括以下浓度的组分：

麦芽戊糖                       10mmol/L～40mmol/L，

α-葡萄糖苷酶               1000U/L～5000U/L，

氯化钙                          10mmol/L～30mmol/L，和

缓冲液                          1mmol/L～50mmol/L。

上述麦芽戊糖、α-葡萄糖苷酶和氯化钙的浓度均指在缓冲液中的终浓度。

上述的检测试剂中，优选的，所述缓冲液的pH值为7.0～7.5。

上述的检测试剂中，优选的，所述缓冲液包括磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液或Tris-盐酸缓冲液。

作为一个总的技术构思，本发明还提供一种α-淀粉酶的检测方法，包括以下步骤：将α-淀粉酶溶液加入上述的α-淀粉酶的检测试剂中进行催化反应，反应完成后，利用便携式葡萄糖检测仪对所得反应产物进行检测，记录检测仪的读数，计算α-淀粉酶溶液的浓度。

上述的检测方法中，优选的，所述便携式葡萄糖检测仪包括便携式血糖仪。

上述的检测方法中，优选的，所述催化反应的时间为5min～60min。

上述的检测方法中，优选的，所述检测方法中的所有操作过程均控制在25℃～45℃条件下进行，更优选的，所述检测方法中的所有操作过程均控制在37℃条件下进行。

上述的检测方法中，优选的，所述α-淀粉酶溶液中α-淀粉酶的浓度为20U·L^-1～1000U·L^-1。

上述的检测方法中，优选的，所述α-淀粉酶溶液的溶剂为缓冲液，所述缓冲液与所述α-淀粉酶的检测试剂中采用的缓冲液相同。

本发明中检测α-淀粉酶的原理为：