[发明专利]强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条，包括在衬板上依次衔接的样品垫、结合垫、包被膜和吸水垫，其特征在于，所述结合垫吸附有主要由能在波长为980nm的光源激发下发出短波长可见光区域发射光的上转换荧光纳米材料与双酚A抗体形成的上转化荧光-双酚A抗体复合物，所述包被膜上间隔分布有检测标记和对照标记，

其中，所述上转化荧光-双酚A抗体复合物包括上转换荧光标记的双酚A多克隆抗体或上转换荧光标记的双酚A单克隆抗体，

所述检测标记包括以双酚A包被抗原溶液在包被膜上印制的检测线，所述对照标记包括以羊抗兔或羊抗鼠IgG抗体溶液在包被膜上印制的对照线，所述检测线与对照线平行分布，

所述双酚A包被抗原包括双酚酸与载体蛋白人血清白蛋白的耦联物。

2.根据权利要求1所述的强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条，其特征在于所述样品垫和/或结合垫的材料包括玻璃纤维棉。

3.根据权利要求1所述的强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条，其特征在于所述衬板的材料主要由不吸水的韧性材料形成，所述韧性材料包括硬质塑胶条。

4.根据权利要求1所述的强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条，其特征在于所述包被膜包括硝酸纤维素膜。

5.根据权利要求1所述的强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条，其特征在于所述吸水垫包括吸水滤纸。

6.一种强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）提供上转换荧光纳米材料，并在上转换荧光纳米材料修饰用以与双酚A抗体偶联的活性基团，而后将双酚A抗体与上转换荧光纳米材料偶联，获得上转化荧光-双酚A抗体复合物，而后将上转化荧光-双酚A抗体复合物施加至结合垫上；

（2）以双酚A包被抗原溶液和羊抗兔或羊抗鼠IgG抗体溶液分别在包被膜上印制形成平行分布的检测线与对照线；

（3）将样品垫、结合垫、包被膜和吸水垫依次衔接且附着在衬板上，获得目标产品。

7.根据权利要求6所述强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条的制备方法，其特征在于还包括：

将疏水性的上转化荧光纳米材料氧化形成亲水性的上转化荧光纳米材料，而后将上转化荧光纳米材料上的羧基活化，使之与双酚A抗体上的氨基结合形成肽键，从而实现上转化荧光纳米材料与双酚A抗体的偶联。

8.根据权利要求6所述强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条的制备方法，其特征在于所述样品垫和/或结合垫的材料包括玻璃纤维棉；

所述衬板的材料主要由不吸水的韧性材料形成，所述韧性材料包括硬质塑胶条；

所述包被膜包括硝酸纤维素膜；

所述吸水垫包括吸水滤纸。

9.一种强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）将1.2g NaOH、9mL 水、10mL乙醇、20mL油酸混合，然后加入0.6mol 的稀土氯化物后再搅拌混合，在此基础上再将4mL浓度为1M的NaF逐滴加入，并继续搅拌10min后加入50mL 的反应釜中，密封后160℃下加热8h，然后停止加热并冷却到室温，产物沉淀到底部后先用环己烷溶解再用乙醇和水进行洗涤，离心分离，接着用乙醇洗涤3次，最后在真空中干燥，获得疏水性上转换荧光纳米材料，

而后，将0.1g疏水性上转换荧光纳米材料与100 mL环己烷、70mL叔丁醇、10mL水、5mL浓度为5wt%的K₂CO₃溶液混合后搅拌20min，然后逐滴加入20mL含5.7M KMnO₄和0.105M的NaI0₄的水溶液，并在40℃下搅拌48h，反应完成后，分离出固形物，并清洗，而后再加入50 mL pH值4-5的HCl 溶液并搅拌30min, 最后再次分离出固形物，并洗涤，获得具有球形结构的、粒径为30-50nm的亲水性上转换荧光纳米材料；

（2）将5mg亲水性上转换荧光纳米材料、5mg 1-乙基-3-(3-二甲基胺丙基)碳化二亚胺、15mg N-羟基琥珀酰亚胺在室温下搅拌8h, 然后离心洗涤，将所获得沉淀物溶解在包含2mg/mL抗体的PBS缓冲液中，链接反应在4℃进行48h，之后用赖氨酸除去多余的N-羟基琥珀酰亚胺，最后经过离心分离、洗涤得到上转化荧光-双酚A抗体复合物；

（3）将上转化荧光-双酚A抗体复合物以重悬液重悬，所述重悬液为浓度在0.01mol/L，pH值 9.0的磷酸盐缓冲液，该磷酸盐缓冲液中还含有蔗糖、吐温20、牛血清蛋白和聚乙二醇；

（4）将步骤（3）所获上转化荧光-双酚A抗体复合物重悬液按照1:10～50的体积比稀释后喷着于玻璃纤维膜上，37℃条件下干燥，制得吸附有上转换荧光探针的结合垫；

（5）在硝酸纤维膜上以浓度为0.5mg/mL双酚A包被抗原溶液喷制检测线，以及用羊抗兔或羊抗鼠IgG溶液喷制对照线，两条线平行排列，并在37℃下干燥；

（6）将样品垫、结合垫、硝酸纤维膜和吸水垫依次粘附在衬板上，获得所述强抗基质干扰型双酚A上转换荧光层析试纸条。