[发明专利]内生生防菌株及其制成的生防菌剂的制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物菌种防治石榴腐烂的领域，尤其涉及一种内生生防菌株及其制成的生防菌剂的制备方法与应用。 

背景技术

石榴（Punica granatum），别名安石榴，石榴科石榴属。原产于伊朗、阿富汗等国家，现已在亚洲、非洲、欧洲沿地中海各地，均作为果树栽培，而以非洲尤多。在我国，除了东北等极寒冷的少数省区外，均适合石榴栽培，我国已经形成了最有影响的石榴五大产区，分别为陕西临潼、山东枣庄、安徽怀远、四川会理和云南巧家。石榴是集食用、药用以及观赏于一体的水果，特别是石榴中富含抗氧化物质，是延缓衰老、预防动脉硬化且减缓癌变进程的高水平抗氧化剂。调查表明，我国石榴20%~30%在中秋节和国庆节消费，10%用于加工，50%~60%经过储藏延长货架期在春节前后上市。但是石榴采后果实在贮藏过程中，受到多种致病菌共同作用导致果实腐烂变质，通常腐烂率是30%，严重时可达70%，严重影响了石榴的经济价值。对于贮藏期石榴果实腐烂病由什么病菌引起有两种观点：大部分学者（戴芳澜1934；周又生1999；Jin&Chang 2002，等）认为是由石榴干腐病菌石榴鲜壳孢( Zythia Versoniana Sacc.)引起；2007年付娟妮认为是葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）引起的。目前控制石榴采后腐烂的有效措施是低温贮藏结合化学防腐剂、热、辐射、气调等。常使用的化学防腐剂有甲基托布津（Thiophanate-Methyl）、多菌灵（Carbendazim）、敌霉烟剂（TBZ）等。化学防治是果蔬产后病害防治的主要途径，但随着发现有致癌作用，且污染环境的化学杀菌剂越来越多，使其在果品上的应用受到限制。另外，一些杀菌剂的频繁使用也使病菌产生抗性，防效大为降低，如葡萄孢菌（Botrytis cinerea）、青霉菌（Penicillium sp.）、梨形毛霉菌（Mufcor piriformis Fischer)早已对苯来特（Benlate）有抗性，由于在柑桔上长期使用苯并咪哇类杀菌剂（Benzimidazole fungicide），使原来对其不敏感的柑桔黑腐病菌（Alternaria citri Ellis et. Pierce）和柑桔酸腐病菌（Oospora citriaurantii ex Persoon）种群上升成为新问题。随着消费者对无公害农产品、绿色食品和有机食品的强烈需求，开发高效、低毒、无残留的生物农药已成为迫切希望。生物农药是指利用生物产生的生物活性物质或生物活体作为农药，以及人工合成的与天然化合物结构相同的农药，是不污染环境的绿色农药，可望成为解决化学农药残留污染的有效途径之一。近年来植物根部、叶部病害生物防治的成功实例，大大激发人们将生物防治扩展到果蔬产后病害的防治研究领域。特别自1983年起美国农部以Wilson为主的一批美、以、澳、法等国科学家，在这方面做了大量的研究工作，在美国，已有防治核果类、仁果类、柑桔及一些蔬菜产后病害的几种拮抗菌取得了专利或正在审定。目前，将生物防治技术用于石榴贮藏防腐的研究，国内外没有相关报道。综上所述，筛选有效的生防细菌，开发新型、安全有效的微生物杀菌剂是控制石榴腐烂病的发生，减少贮藏期石榴的损失，促进石榴产业经济稳健发展的迫切需要。 

发明内容

本发明的目的是提供一种内生生防菌株及其制成的生防菌剂的制备方法与应用，能够有效的防止石榴的腐烂、无污染、抑菌率高。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种内生生防菌株，所述菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis，己于2014年1月26日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为CGMCC NO.8812。保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。