[发明专利]从绿茶的下脚料中快速提取分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法

说明书

 

技术领域

本发明涉及医药应用领域，特别是涉及一种从绿茶的下脚料中快速提取分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法。

背景技术

茶叶中的多酚类物质占茶叶干重的18%-36%，包括以儿茶素为主的黄烷醇类、黄酮和黄酮醇类、花青素和花白素以及酚酸和缩酚酸。其中儿茶素类化合物为茶多酚的主体成分，占茶叶干重的12%-24%，占茶多酚总量的70%-80%。现代医学研究发现，茶多酚是一种新型的天然抗氧化剂，具有抗肿瘤、抗衰老、防突变、抑制肿瘤生长、减肥降压及预防心血管疾病等生理作用。而这些生理作用主要是通过其中的儿茶素所表现出来的，其中酯型儿茶素中的表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在许多方面表现出的功效明显强于其他儿茶素组分。 

EGCG的分子式为C₂₂ H₁₈ O_11，分子量458.4，EGCG的分子中含有多个酚羟基，活性中心在两个环上，因此具有很强的抗氧化和清除自由基的能力。EGCG纯品为白色粉末，味苦涩、无毒、极易溶于水，能溶于甲醇、乙醇、乙腈和乙酸乙酯，不溶于氯仿，熔点为 218℃。在空气中易被氧化，变成微粉色，也容易随着温度的升高而被氧化。 

随着人们对茶叶成分保健功能认识的深入，茶多酚的提取分离得到广泛深入的研究，儿茶素单体尤其是酯型儿茶素EGCG的分离制备的研究也越来越受到人们的关注。目前，提取分离EGCG的方法专利较多。其中高纯度EGCG的制备方法专利主要有：

CN1465572A     表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法

CN1470510A     表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化工艺

CN102702163A   从茶叶的下脚料中制备高纯度单体儿茶素的方法

CN1603319A     儿茶素单体的分离纯化方法

CN101386614A   树脂吸附法制备表没食子儿茶素没食子酸酯的方法

CN1733753A     一种表没食子儿茶素没食子酸酯单体纯化方法

CN101381359A   一种从绿茶中提取高纯度表没食子儿茶素没食子酸酯的方法

CN101723927A   一种儿茶素单体EGCG工厂化生产分离纯化方法

CN101074224A   一种高含量的EGCG的制备方法

上述的八项专利，样品都是采用常规的方法进行提取，包括溶剂提取法、金属离子沉淀法、树脂吸附法、超临界流体萃取法、超声波浸提法等，由于茶多酚中除了EGCG外，还含有一定含量的其他物质，因此提取出的EGCG纯度不高。对单组分EGCG的纯化过程，大都是先采用树脂吸附技术进行除杂，其中包括大孔吸附树脂柱，阴阳离子交换树脂柱等，通常采用一根柱或两个性质不同的树脂柱来串联完成，主要的作用是对样品进行吸附，以水为洗脱液，来除去水溶性杂质后再以稀醇进行解吸附。单凭上述的手段，无法来达到EGCG的纯度要求，而上述8项专利的关键纯化步骤在于最后几步都采用了色谱分离技术手段，包括使用超临界流体色谱、葡聚糖凝胶色谱、中低压硅胶层析色谱、C18液相色谱制备技术等手段，最后通过重结晶的方法，使EGCG达到很高的纯度。

     上述的8项专利的不足之处在于操作过程复杂，对实验条件要求苛刻，由于采用高端的实验仪器和昂贵的化学试剂，使得制备成本很高、且操作不易控制。而且多次采用了柱吸附分离过程，损失较大，使得产品收率较低，并在过程中引入了大量的有机溶剂，操作步骤仅限于实验室，产品不能实现产业化。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种能够充分利用绿茶的下脚料来快速提取分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，使得绿茶的下脚料作为废弃物得到了回收利用，同时也解决了EGCG在纯化过程中，步骤复杂，耗时长，所用溶剂毒性大，产品收率低，不能实现产业化等问题。 

本发明所述从绿茶的下脚料中快速提取分离纯化表没食子儿茶素没食子酸酯的方法，包含如下步骤：

（1）绿茶的下脚料用60%乙醇超声震荡提取，提取时间为30分钟，提取两次，合并提取液；

（2）提取液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20至1.22的清膏；

（3）将（2）中获得的清膏用聚酰胺树脂柱吸附分离；

（4）薄层色谱跟踪检测，收集表没食子儿茶素没食子酸酯流分，用活性炭脱色后，过滤，滤液于60℃-80℃低温减压，通氮气保护，浓缩至相对密度为1.15-1.18，冷冻干燥；