[发明专利]一种透明质酸靶向的碳纳米管负载抗癌药物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于负载抗癌药物领域，特别涉及一种透明质酸靶向的碳纳米管负载抗癌药物的制备方法。

背景技术

抗癌药物的毒副作用和水溶性差一直是肿瘤化学治疗中的瓶颈问题，因此使用药物输送系统受到了广泛的关注。纳米载药系统凭借其独特的尺寸范围（1-100nm）不仅可以降低药物的生物毒性，有效提高药物的溶解度和稳定性，还可以并且可以通过对药物载体的修饰、载体药物的选择以及负载方法的设计来控制药物的缓释与定向输送，从而达到最佳的治疗效果。

作为一种新型的纳米级别材料，碳纳米管在生物应用方面表现出了良好的潜能，由于碳纳米管能够携带药物分子进入细胞，其表面连接靶向分子后，还可以实现特异性地靶向目标细胞，因此碳纳米管很可能成为未来抗肿瘤药物的理想载体，目前在基因、药物、蛋白载体方面已经获得广泛的研究。由于碳纳米管本身一般没有可供反应的基团，不具有化学活性，所以在常见溶剂中存在易团聚、难分散的现象，这在很大程度上限制了碳纳米管的研究与应用。因此，我们期望在保持碳纳米管不被破坏，并保持中空管状结构完整的前提下，使用化学方法对碳纳米管进行一定程度的修饰，将一些活性官能团（羟基，羧基等）引入到碳纳米管的表面。这不仅能够提高碳纳米管在常见溶剂中的溶解性，还能够通过表面修饰的活性基团为碳纳米管赋予新的功能。

聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine，PEI)是一种携带大量氨基的高分子聚电解质材料，分为直链型和超支化型两种，由于氨基的存在，可以连静电吸附许多物质，也可以化学键合一些反应基团。

聚乙烯亚胺同时也是一种高效的非病毒基因载体，它所具有的多个氨基使得PEI具有非常高的转染效率。但是过多的表面氨基也加大了其细胞毒性，因此限制了PEI的应用。因此，有必要对聚乙烯亚胺进行表面改性，一方面降低其细胞毒性；另一方面赋予PEI以新的功能，拓宽其应用范围。

透明质酸（HA）主要分布于机体的组织、体液及细胞间质中。可以与细胞表面受体(CD44)结合，调节细胞的迁移、粘附和增殖.透明质酸在正常组织的含量很低，当机体出现免疫反应、变态反应等才会出现升高.研究结果表明，CD44与HA的特异性结合可促使已进入血流的癌细胞倾向于向HA转移，并且HA特异性受体CD44在多种恶性肿瘤中（Hela，KB等细胞）中均存在过度表达。采用透明质酸-荧光探针技术，可动态观察到CD44在机体内的分布状况，同样也可作为含透明质酸受体肿瘤治疗的靶向位点及对恶性肿瘤判断的依据。

盐酸阿霉素(Doxorubicin，DOX)属蒽环类抗肿瘤抗生素，是一种抑制DNA和RNA合成的抗肿瘤药物。其作用机制主要是嵌入DNA的相邻碱基对使DNA发生错配，从而使DNA链裂解，阻碍DNA和RNA合成，对RNA的抑制作用最强。DOX抗瘤谱比较广，对多种肿瘤均有作用，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用，属于周期非特异性药物。然而，DOX在大剂量时会对正常细胞也会产生强烈的细胞毒性。因此，为了降低DOX对人体的正常组织造成毒副作用，使用药物载体对DOX进行负载，控制其释放是十分必要的。

检索国内外有关DOX靶向运输方面的文献和专利表明：以透明质酸修饰的碳纳米管为载体材料，通过π-π堆积作用负载阿霉素，达到靶向、pH敏感释放的多重功效的研究还没有报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种透明质酸靶向的碳纳米管负载抗癌药物的制备方法，该方法操作简单、反应条件温和；该碳纳米管复合材料可装载抗肿瘤药物DOX，该载药复合物具有pH值敏感释放，并且能够主动对HeLa细胞进行靶向的杀伤作用。

本发明的一种透明质酸靶向的碳纳米管负载抗癌药物的制备方法，包括：

（1）将多壁碳纳米管分散在二甲基亚砜溶液中，加入EDC活化；加入PEI的二甲基亚砜溶液，于常温下反应1～2天，透析除去未反应杂质，冷冻干燥得到MWCNT/PEI；

（2）将上述MWCNT/PEI溶于水中，加入FITC的二甲基亚砜溶液，得到MWCNT/PEI-FI溶液；将1～2g透明质酸溶解在水中加入EDC活化，加入MWCNT/PEI-FI溶液中，常温下反应1～2天，透析除去未反应杂质，最后冷冻干燥得到MWCNT/PEI-FI-HA；

（3）将上述MWCNT/PEI-FI-HA溶解于水中，加入DOX的水溶液，调节pH值，充分搅拌，透析冻干即得透明质酸靶向的碳纳米管负载抗癌药物。

所述步骤（1）中的多壁碳纳米管与PEI的质量比为1:1～1:2。