[发明专利]一种中药材多指标成分含量的快速测定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药质量控制技术领域，涉及一种以近红外光谱快速测定中药多指标成分含量的快速测定方法，尤其涉及一种水蛭或地龙药材多指标成分含量的快速测定方法。

背景技术

水蛭是一味传统中药，有效成分包括氨基酸、多肽、次黄嘌呤、黄嘌呤、总磷脂、多糖、生物活性物质等。近年来，发现其对心脑血管疾病具有很好的治疗作用，临床上用于脑血栓、冠状动脉粥硬化性心脏病及脑水肿的治疗。

地龙具有悠久的药用历史，富含多种氨基酸、核酸成分，具有抗血栓、抗癌、增强免疫、抗溃疡、保肝等作用。近几十年对地龙的化学成分和药理作用研究，临床用于咳喘、头痛目赤、咽喉肿痛、小便不通、风湿关节炎、半身不遂等症。

水蛭和地龙药材是我国常用药材之一，因来源复杂，成分含量差异很大。过去药材的传统投料方式直接影响其成品质量的均一性，甚至导致成品批次间的较大差异，本发明能够科学准确控制药材的投料量。

近红外光谱分析技术，近年来随化学计量学而迅速发展，已经越来越多被应用于中药研究，包括药材产地鉴别、有效组分含量测定和制药过程的在线检测，实现了快速测定药材的有效成分，杜绝盲目投料，科学控制投料量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药材多指标成分含量的快速测定方法，是一种基于近红外光谱快速测定水蛭和地龙药材多指标成分含量的快速测定方法，可实现快速评价水蛭和地龙药材综合质量。所述中药材包括水蛭和地龙药材。

本发明是通过以下技术方案实现：

（1）采集水蛭或地龙药材的近红外光谱：将不同产地、不同采收季节的水蛭或地龙药材，置恒温烘箱中除去表面水分，打粉过筛并取适量水蛭或地龙药材粉末置近红外光谱仪的旋转杯中，平铺1 cm厚度的药材粉末，保持粉末表面平整，使用近红外积分球漫反射采集光谱，以空气为参比，扫描次数为32，分辨率为8 cm^-1，吸光度数据格式为：log1/R，光谱扫描范围为4000～10000 cm^-1，将得到的光谱数据分为校正集和验证集两类。

（2）测定水蛭或地龙药材的多指标成分含量：水蛭或地龙药材的多指标成分相同，都包括水分、可溶性固形物、次黄嘌呤、总糖和多糖及游离氨基酸和多肽。采用烘干法测定水分和可溶性固形物，间接碘量法（碘液-硫代硫酸钠滴定法）测定总糖和多糖，高效液相色谱法测定次黄嘌呤、游离氨基酸和多肽。

（a）水分含量的测定：采用《中国药典》——烘干法测得水蛭或地龙药材的水分含量，采集水蛭或地龙药材的近红外光谱后，取适量水蛭或地龙药材粉末于105℃的恒温干燥箱中5 h，在干燥器中冷却20～30 min后称量，再在105℃下干燥1 h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg，根据减失的重量，计算样品的水分含量。

（b）可溶性固形物含量的测定：采用烘干法测定水蛭或地龙药材的可溶性固形物含量；精密移取0.1 g/mL的水蛭或地龙药材浸提液4 mL至已烘干至恒重的扁形瓶（X₀），称重（X₁），置105℃烘箱中，每隔一个小时称重，直至连续两次称重重量差距小于5 mg，最终重量计X₂，可溶性固形物（%）＝（X₂－X₀）／（X₁－X₀）×100%，计算样品的可溶性固形物含量。

（c）次黄嘌呤含量的测定：采用HPLC测定水蛭或地龙药材的次黄嘌呤含量；取适量0.1 g/mL的水蛭或地龙药材浸提液过滤膜，取滤液进样10 μl，按如下HPLC色谱条件用高效液相色谱法测定峰面积，用外标法计算样品的次黄嘌呤含量；

次黄嘌呤HPLC色谱条件：色谱柱Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相A：0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液；流动相B：50％甲醇；梯度洗脱步骤：0～5 min为100%A相，5～10 min为100%～99%A相，10～50 min为99%～0%A相，后运行10 min；检测波长254 nm；进样量10 μl；柱温25 ℃；流速1 mL/min。

（d）总糖和多糖含量的测定：采用间接碘量法的碘液-硫代硫酸钠滴定法测定水蛭或地龙药材的总糖和单糖，依据硫代硫酸钠的消耗量，先计算碘液的消耗量，再计算样品的总糖和单糖，多糖含量通过总糖含量减去单糖含量得到。