[发明专利]一种高灵敏度抗CD20单克隆抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物样本检测领域，具体地，涉及利妥昔单抗(Rituximab)等抗CD20单克隆抗体的检测。

背景技术

目前已有多种方法用于检测利妥昔等重组人-鼠嵌合抗CD20单克隆抗体。如利用利妥昔单抗的单克隆抗体或多克隆抗体用ELISA法检测。有报道利用未标记的羊抗利妥昔单抗多克隆抗体作为包被物，HRP-羊抗人Fc片段作为二抗建立ELISA实验来检测利妥昔单抗。也有人设计了一种鼠抗利妥昔单抗MB2A4，用该抗体作为包被物，HRP-羊抗人Fc片段作为二抗建立ELISA实验来检测利妥昔单抗。还可以利用猴血清吸附过的未标记的羊抗人作为包被物，猴血清吸附过的HRP-羊抗人作为二抗建立ELISA实验来检测利妥昔单抗。这些方法都是常规的基于抗原-抗体的ELISA法。

上述的这些方法仍存在一些缺点。比如多克隆抗体特异性不强，单克隆抗体成本较高，且利用抗原和抗体结合原理设计的常规ELISA法都存在背景较高及一定程度的交叉反应，在检测临床血样时往往尤其突出，血液中其他成分严重干扰利妥昔单抗的检测。

因此，本领域迫切需要建立一种新的用于检测抗CD20单克隆抗体的背景低、专一性强、灵敏度高、成本低的ELISA方法，以便用于检测生物样品中的CD20单克隆抗体。

发明内容

本发明提供了一种高特异性和灵敏度的检测抗CD20单克隆抗体的多肽及其应用。

本发明的第一方面，提供了一种多肽，具有如式I的结构：

X0-Cys-Pro-Tyr-Ala-Asn-Pro-Ser-Leu-Cys-X1

式I；

其中，X0为无，或保护基，或1-10个氨基酸构成的肽段；X1为无，或1-10个氨基酸构成的肽段；

且所述多肽具有与抗CD20单克隆抗体结合的活性。

在另一优选例中，所述的抗CD20单克隆抗体包括嵌合抗体、人源化抗体、非人源化抗体、单链抗体、抗体片段。

在另一优选例中，所述的抗CD20单克隆抗体为人-鼠嵌合抗体。

在另一优选例中，所述的抗CD20单克隆抗体来源于哺乳动物，较佳地来源与人或啮齿动物，更佳地，来源于人、小鼠或大鼠。

在另一优选例中，所述抗CD20单克隆抗体的最低浓度级别为1×10^-1μg/ml。

在另一优选例中，所述的保护基包括乙酰基（CH3-CO-）或叔丁氧羰基（Boc）；和/或

X0为8-9个、6-7个、4-5个或2-3个，更佳地1-2个氨基酸构成的肽段；和/或

X1为8-9个、6-7个、4-5个或2-3个，更佳地1-2个氨基酸构成的肽段。

在另一优选例中，X1为乙酰基。

在另一优选例中，所述抗CD20单克隆抗体包括利妥昔单抗(Rituximab)。

在另一优选例中，式I多肽中的两个Cys之间形成链内二硫键。

在另一优选例中，所述多肽不结合于IBI302或VID等融合蛋白、或等单抗。

在另一优选例中，X0或X1不含有Cys残基。

本发明第二方面，提供了一种偶联物，所述的偶联物是本发明第一方面所述多肽与载体蛋白偶联形成的偶联物。

在另一优选例中，所述的偶联是通过式I多肽的羧基端偶联的。

在另一优选例中，所述的载体蛋白包括牛血清白蛋白(BSA)、血蓝蛋白(KLH)、卵清蛋白或γ球蛋白。

在另一优选例中，所述蛋白质载体是血蓝蛋白或牛血清白蛋白。

本发明第三方面，提供了一种本发明第一方面所述多肽或本发明第二方面所述偶联物的用途，用于制备检测样品中利妥昔单抗等抗CD20单克隆抗体的试剂、检测板或试剂盒。

在另一优选例中，所述样品包括为血液样品、血清样品、组织液样品或单抗药物样品。

本发明第四方面，提供了一种检测样品中是否含有利妥昔单抗等抗CD20单克隆抗体的方法，包括步骤：

(a)将样品与本发明第一方面所述的多肽或本发明第二方面所述的偶联物接触；

(b)检测是否形成抗原-抗体复合物，其中形成复合物就表示样品中存在抗CD20单克隆抗体。

本发明第五方面，提供了一种本发明第四方面所述的方法，其特征在于，在步骤(a)中，将样品与本发明第一方面所述的多肽或本发明第二方面所述的偶联物接触，并且在步骤(b)中通过ELISA法进行检测。