[发明专利]噬菌体展示文库及其应用和制备方法

权利要求书

1.一种噬菌体展示文库，包含一系列各自独立地具有三维结构的抗体性多肽，所述多肽中的每一者均包含具有抗体性重链CDR1结构域、抗体性重链CDR2结构域和抗体性重链CDR3结构域的重链、以及具有抗体性轻链CDR1结构域、抗体性轻链CDR2结构域和抗体性轻链CDR3结构域的轻链，其特征在于：所述抗体性重链CDR1、CDR2和CDR3结构域以及所述抗体性轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域都具有强随机突变性位点，所述强随机突变性位点是位于所述多肽三维结构表面上的用于结合靶抗原的且非保守性的位点，所述强随机突变性位点是由强随机突变简并密码子编码的氨基酸，并且所述强随机突变简并密码子不包括终止密码子；

其中所述抗体性多肽的氨基酸序列采用Chothia编号系统编号时，所述强随机突变性位点为：所述抗体性重链CDR1结构域的第33位氨基酸，所述抗体性重链CDR2结构域的第50、52、56、58位氨基酸，所述抗体性重链CDR3结构域的第95至(95+k)位氨基酸，所述抗体性轻链CDR1结构域的第30、31位氨基酸，所述抗体性轻链CDR2结构域的第50位氨基酸，以及所述抗体性轻链CDR3结构域的第91至(91+j)位氨基酸；其中k为3至14的整数，j为3至6的整数；并且

其中所述强随机突变简并密码子选自NNY和NVY。

2.根据权利要求1所述的噬菌体展示文库，其中所述抗体性重链CDR1、CDR2和CDR3结构域以及所述抗体性轻链CDR1、CDR2和CDR3结构域都具有弱随机突变性位点，所述弱随机突变性位点是溶剂可及且非保守性的位点，其是由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸，并且所述弱随机突变简并密码子不编码破坏所述多肽三维结构稳定性的氨基酸。

3.根据权利要求2所述的噬菌体展示文库，其中所述弱随机突变性位点各自所包括的氨基酸包括：在天然鼠源抗体相应位点处的出现频率至少为65％的氨基酸和/或出现频率之和至少为65％的氨基酸。

4.根据权利要求2所述的噬菌体展示文库，其中所述抗体性多肽的氨基酸序列采用Chothia编号系统编号时，

所述抗体性重链CDR1结构域包含连续氨基酸序列X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9，其中X1至X9依次对应所述Chothia编号系统的第27至第35位，X7为由强随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，X1、X2、X4、X5、X8和X9为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，X3任选地为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种；

所述抗体性重链CDR2结构域包含连续氨基酸序列Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Y7-Y8-Y9-Y10-Y11-Y12，其中Y1至Y12依次对应所述Chothia编号系统的第50至52、52A、53至60位，Y1、Y3、Y8和Y10为由强随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，Y5至Y7、Y12为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，Y4和Y9任选地为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种；

所述抗体性重链CDR3结构域各自独立地包含连续氨基酸序列(Z1)_m-Z2-Z3，其中第1个Z1对应所述Chothia编号系统的第95位，Z2和Z3依次对应所述Chothia编号系统的第101位之前倒数第2位和第101位之前倒数第1位，m为4至15的整数，Z1为由强随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，Z2和Z3各自独立地为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种；

所述抗体性轻链CDR1结构域包含连续氨基酸序列x1-x2-x3-x4-x5-x6，其中x1至x6依次对应所述Chothia编号系统的第27至32位，x4和x5为由强随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，x1至x3为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，x6任选地为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种；

所述抗体性轻链CDR2结构域包含连续氨基酸序列y1-y2-y3-y4-y5-y6-y7，其中y1至y7依次对应所述Chothia编号系统的第50至56位，y1为由强随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，y2、y4至y7为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种；以及

所述抗体性轻链CDR3结构域各自独立地包含连续氨基酸序列z1-z2-(z3)_n-z4-z5，其中z1、z2和第1个z3依次对应所述Chothia编号系统的第89至91位，z4和z5依次对应所述Chothia编号系统的第97位之前倒数第2位和第97位之前倒数第1位，n为4至7的整数，z3为由强随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种，z1和z5各自独立地为由弱随机突变简并密码子编码的氨基酸中的任意一种。