[发明专利]一种具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列及其应用

说明书

技术领域

本发明属于多肽技术领域，涉及一种具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列及其应用。

背景技术

珍珠贝的种类很多，有珍珠贝、大珍珠贝、合浦珠母贝、企鹅珍珠贝等，其中以合浦珠母贝最普通，是世界上生产养殖珍珠的主要贝种。我国海南、广东、广西等省合浦珠母贝资源丰富，是南海主要的近海养殖“南珠”的母贝，每年采珠后珠母贝肉达几千吨，由于其风味问题而较少用于冷鲜食品。珍珠具有抗氧化，防衰老美白的功效，也有学者发现合浦珠母贝肉含有丰富的优质蛋白和不饱和脂肪酸，其不同酶的酶解液具有降血压、解离镉金属离子、抗疲劳和抗氧化等作用。与在市面上用于食品、药品以及化妆品和饲料的工业合成的添加剂相比，其安全性和效用都很高，使之成为当前国际的热门研究课题。

抗氧化肽具有延缓机体衰老的功能活性，不仅能够清除体内的自由基，减轻自由基对机体的损伤，而且能够防止紫外线引起的线粒体的损伤和自由基诱导的脂质过氧化，抗氧化肽还能够为抗氧化酶提供氢和螯合金属离子。天然抗氧化剂在医药、化妆品、保健品和食品与饲料添加剂等方面应用前景广阔，筛选具有强抗氧化活性的天然资源已成为食品科学、生物学、医学等研究的新趋势。而从合浦珠母贝肉中获得具有抗氧化活性的抗氧化肽序列，对其今后的开发应用具有广泛的意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列，该序列具有抗氧化功能。

本发明的目的还在于提供上述具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列在制备具有抗氧化活性作用的食品、保健食品、化妆品、药物或饲料中的应用。

本发明的第一个目的是通过如下技术手段来实现的：一种具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列，其氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

本发明可以通过微波辅助酶解法制备获得该具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列，具体的制备过程如下：选取合浦珠母贝贝肉，采用微波辅助Alcalase2.4L蛋白酶酶解提取，得酶解液，将酶解液经脱盐和分离纯化处理，收集分子量在800～1200Da之间的分离液，得到的肽液即为具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列。

其中微波辅助Alcalase2.4L蛋白酶酶解提取时，微波温度优选为55～62℃，微波功率优选为280～300W，微波时间优选为15～20min，加酶量优选为在1g合浦珠母贝贝肉中加入4500～5500u的Alcalase2.4L蛋白酶，微波处理后继续在55～62℃下再水浴1.2～2h。

较佳的条件为微波温度为58℃，微波功率300W，微波时间为17min，加酶量为在1g合浦珠母贝贝肉中加入5000u的Alcalase2.4L蛋白酶，微波处理后继续在58℃下再水浴1.5h。

酶解液脱盐处理时优选采用C18柱。也可以用其他脱盐方式，此步骤的目的是脱除酶解液中的盐。

酶解液分离纯化处理时优选采用交联葡聚糖Sephadex G-25层析柱进行分离纯化。

经过RP-HPLC、MALDI-TOF-TOF二级质谱分析和氨基酸组成分析发现，本发明制备获得的上述肽液中所含的主肽段分子量为1039.56Da，分析该肽的序列为：Gly-Ala-Gly-Leu-Pro-Gly-Lys-Arg-Glu-Arg。

因此，本发明申请人又尝试性的采用人工方式合成上述序列的具有抗氧化活性的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列，经还原力、DPPH自由基、OH自由基以及超氧阴离子清除能力分析发现，该人工合成的合浦珠母贝肉抗氧化肽序列也具有抗氧化性，因此，在从天然原料合浦珠母贝肉中提取效率较低，提取成本较高等的情况下，可以采用人工合成该合浦珠母贝肉抗氧化肽序列，从而可以在工业上大规模应用。

本发明人工合成合浦珠母贝肉抗氧化肽序列采用Fmoc固相合成法，合成原理为先将所要合成肽链的羟末端氨基酸的羟基以共价键的结构同一个不溶性的高分子树脂相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过脱去氨基保护基并同过量的活化羧基组分反应，接长肽链；重复（缩合→洗涤→去保护→中和及洗涤→下一轮缩合）操作，达到所要合成的肽链长度，最后将肽链从树脂上裂解下来，经过纯化等处理，即得所要的多肽。