[发明专利]分枝杆菌分离培养试剂盒及其测试方法

说明书

技术领域

本发明涉及分一种试剂盒，尤其涉及一种枝杆菌分离培养试剂盒及其测试方法。

背景技术

结核病是严重危害人体健康的呼吸道传染病，我国是全球22个结核病高负担国家之一。根据2010 年全国第五次结核病流行病学调查结果，估算我国全人群活动性肺结核患病率为459/10 万，其中传染性肺结核患病率为66/10 万。提高结核病的检出率和缩短检测时间，可以更加及时早期的发现结核患者，使结核患者得到及时有效的治疗，对于预防和控制结核病的传播具有重要的意义。结核菌的分离培养是结核病诊断的重要依据之一，目前培养法仍然是结核病最客观、最重要和最科学的检测方法，微生物感染诊断的“金标准”是培养法，结核病人的细菌学检测是结核病诊断、治疗及评价治疗效果的可靠手段，适用于各个单位。长期以来临床上普遍使用的罗氏培养基，由于其营养成分比较简单，分枝杆菌特别是慢生长分枝杆菌的分离培养速度比较慢，且对临床标本中的结核分枝杆菌的分离培养阳性检出率偏低。世界卫生组织大力提倡采用液体培养基进行分枝杆菌分离培养检测。但是试剂依赖进口，例如BACTEC-960系统或BacT/ALERT 3D系统，其优点是营养成分高，培养速度快，缺点是价格昂贵，不能直观观察结果，需特殊仪器(设备与培养基均需进口)；而我国结核患者主要分布于农村、边远地区等经济条件较差的地区，大多无法承受快速液体培养仪检测系统昂贵的检测费用，因此针对我们结核病疫情特点，急需开发既可以提高阳性检出率又可以缩短检测时间的价廉的结核分枝杆菌培养分离试剂，但是目前国内可用于临床的市场化试剂盒还没有。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种价格低廉、既可提高待检标本中的分枝杆菌的阳性检出率，又可以缩短检测时间，且无需特殊仪器设备的分枝杆菌分离培养试剂盒及其测试方法。

本发明所述分枝杆菌分离培养试剂盒所采用的技术方案是：所述试剂盒包括盒体，所述盒体上包含有固体培养基、液体培养基、无菌稀释液及杂菌抑制剂。

所述固体培养基为传统的改良罗氏培养基组分。

所述液体培养基由基础培养基、促生长剂、抑菌剂和显色剂组成。

所述无菌稀释液由钾盐和钠盐无菌溶液组成。

所述杂菌抑制剂由多粘菌素B、两性霉素B、萘啶酸、阿洛西林和甲氧苄啶的冻干制剂组成。

所述显色剂为酚红。

所述促生长剂为抗生素系统。

本发明所述分枝杆菌分离培养试剂盒的测试方法所采用的技术方案是，该方法包括以下步骤：

（1）对待检标本进行抗污染液化处理；

（2）取出冻干杂菌抑制剂，旋开瓶盖，将无菌稀释液全部加入后充分摇匀；

（3）取出固体培养基和液体培养基，使其在接种待检标本前接近室温，吸取混合均匀的杂菌抑制剂加入液体培养基，充分混合均匀；

（4）取混合均匀的液体培养基，加入固体培养基，得到双相培养基；

（5）取经过上述步骤（1）处理后的待检标本0.1ml，在无菌条件下接种于经过步骤（4）处理的培养基里，置37℃温箱孵育；

（6）接种后3天、7天各观察结果一次，以后每周观察结果两次；培养至6周固体培养基表面仍无任何菌落生长或液体培养基无任何变化为培养阴性；固体培养基斜面上出现菌落，或在液体培养基中出现红色或粉红色颗粒状生长为培养阳性。

更进一步地，所述液体培养基中的基础培养基、促生长剂、抑菌剂和显色剂的混合比例为900︰100︰1︰1。

本发明的有益效果是：本发明试剂盒提供完整的配套试剂及指导说明，临床用户根据说明书进行标本中分枝杆菌的检测；本试剂盒兼具了液体培养基和罗氏培养基的双重优点，液体优势和固体优势体现一管，既具有检测时间缩短，阳性检出率高的优点，又具有可以观察分枝杆菌聚落形态的优势，且不需要特殊的仪器设备，适合在我国各级医疗机构，特别是基层及资源相对匮乏的地区推广使用。

附图说明

图1所述试剂盒的简易结构示意图。

具体实施方式

本发明试剂盒包括盒体1，所述盒体1上包含有固体培养基2、液体培养基3、无菌稀释液4及杂菌抑制剂5，具体如下。

1、固体培养基按照传统的改良罗氏培养基进行生产，用80×25mm的光滑透明聚碳酸酯圆柱形管灌装为8ml/支，通过蒸汽恒温箱50min、85℃进行凝固。包装为24支/盒。