[发明专利]基于梨基因组开发的IRAP标记及其应用

权利要求书

1.基于梨基因组开发的IRAP标记引物，是指以下8条引物中的一条或任意两条或任意多条引物：

PbrRE1-2  5’-TCAAACCAAACAATGTGGTCA-3’；

PbrRE1-4  5’- TGATTGGAAGAATGCGATCTAA-3’； 

PbrRE2-2  5’- ACCGTGATGGAATGGTAAGC-3’； 

PbrRE4-1  5’-GATAATTGATCCGGCCCATA-3’； 

PbrRE5-1  5’-AAATACCCAAGTCCCCAAGC-3’； 

PbrRE6-1  5’- AAGGAATATGGTTGGAGTCCTTC-3’； 

PbrRE7-1  5’- TGTTGGAGAGTTGACCTTTTG-3； 

PbrRE8-1  5’- GCATGGGCAAAGTTTTCAAT-3’。

2.权利要求1所述基于梨基因组开发的IRAP标记引物的应用，其特征在于：

1）以提取的待测2份以上梨品种样品DNA为模板，用权利要求1所述8条引物中的一条或任意两条或任意多条引物进行PCR扩增，上下游引物为同一条引物；

PCR反应体系是：20μl的总体系中含有1.0μl 浓度为100 ng/μl的模板DNA，2.5μl 10×Buffer 包含Mg²⁺， 1.5μl 2.5 mM dNTP，3μl 的浓度为10 pmol/μl引物，0.3μl 浓度为5 U/μl Taq DNA聚合酶；

PCR反应程序是：94℃预变性4min，然后94℃ 15s，56℃ 40s，72℃ 2min，共37个循环，72℃ 延伸 10min 后在 10℃ 条件下保存；

PCR产物加入4.0μl 6 X loading buffer，95℃ 变性5min，冰浴5min，采用质量比8%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；

2）以2000bp Marker为DNA分子量标准，统计各待测样品的扩增条带数，各条带进行编号后，使用软件POPGENE v.1.32计算待测两两品种间的DICE遗传相似系数；

3）利用NTSYS pc V 2.1 软件的SHAN模块对两两品种间的DICE遗传相似系数矩阵进行基于UPGMA法的聚类分析，得到的聚类结果显示品种间遗传关系远近。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：根据权利要求2步骤3）所述的聚类结果进行梨无性系芽变品种真实性鉴定或品种资源的遗传多样性评价。