[发明专利]一种新型高强度羊毛

权利要求书

1.一种拟蜘蛛牵丝蛋白基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种拟蜘蛛牵丝蛋白基因四聚体，其特征在于，是将SEQ ID NO.1所示序列加倍成四聚体，所得四聚体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.携带权利要求1或2所述基因的载体、转基因细胞系、重组菌或动物。

4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

5.一种高强度羊毛，其特征在于，是表达了拟蜘蛛牵丝蛋白基因的羊毛。

6.根据权利要求5所述的高强度羊毛，其特征在于，是表达了SEQ ID NO.2所示拟蜘蛛牵丝蛋白基因四聚体的羊毛。

7.根据权利要求6所述的高强度羊毛，其特征在于，是以SEQ ID NO.3所示的表达载体表达了SEQ ID NO.2所示基因的羊毛。

8.一种制备权利要求5所述高强度羊毛的方法，是通过构建携带拟蜘蛛牵丝蛋白基因的毛囊特异性表达载体以及体细胞核移植，制备表达拟蜘蛛牵丝蛋白基因的克隆羊，以获得的克隆羊生产高强度羊毛。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，具体步骤为：

（1）克隆角蛋白结合蛋白Kap6.1启动子，置换载体pEGFP-N1上的原始启动子CMV，构建了表达载体pKap-EGFP，载体pKap-EGFP的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

（2）人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体并加倍成四聚体；

（3）在pKap-EGFP载体的多克隆位点引入目的基因拟蜘蛛牵丝蛋白四聚体，构建了毛囊特异表达载体pKap-E4S；

（4）培养新疆美利奴细毛绵羊胎儿皮肤成纤维细胞，利用脂质体的方法进行了基因转染，经G418筛选、DNA和RNA水平鉴定后获得阳性转基因细胞；

（5）以体外成熟卵母细胞做供体，转基因阳性细胞做受体，利用核移植的方法制备了克隆重组胚胎，通过胚胎移植的方法生产转基因克隆羊产高强度羊毛。

10.一种产权利要求5所述羊毛的羊的制备方法，是通过转基因技术制备表达拟蜘蛛牵丝蛋白基因的转基因羊。