[发明专利]一种进行全血基因组快速扩增的方法有效
| 申请号： | 201410010668.4 | 申请日： | 2014-01-09 |
| 公开（公告）号： | CN103789299A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 李望丰;蔡一荣;关尔鑫;赵世源;王丹;肖樊;周凯;任旭 | 申请（专利权）人： | 东北制药集团辽宁生物医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 沈阳维特专利商标事务所(普通合伙) 21229 | 代理人： | 甄玉荃 |
| 地址： | 110027 辽宁省沈*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 进行 基因组 快速 扩增 方法 | ||
1.一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：全血基因组快速扩增的方法是通过核酸释放剂及与之相匹配的PCR反应液来实现的，主要步骤为，取5μl核酸释放剂加入到PCR反应管中，然后取5μl血液与之混合，室温静止5-10分钟，然后取40μl配置好的PCR反应液直接加入上述混合液中，最后上机扩增。
2.如权利要求1所述的一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：所述核酸释放剂组成为0.1-0.5M NaOH，5-50mM Chaps，75-750mM(NH4)2SO4，0.1-2M甲酰胺。
3.如权利要求1所述的一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：所述PCR反应液组成为30mmol/L Tris-HCl（PH7.5），10mmol/L(NH4)2SO4，30mmol/LKCl，4.5mmol/LMgCl2。
4.如权利要求1或3所述的一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：所述PCR反应液中添加0.1-0.5M Betaine，0.01-0.1%Gelatin，0.5-5mg/ml BSA，50-500mmol/L海藻糖。
5.如权利要求1所述的一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：所述PCR反应液中dNTPs的组成比例为：dATP:dCTP:dGTP:dTTP=1:1:1:1:1，其使用浓度为200-800μm，优选使用浓度为600μm。
6.如权利要求1所述的一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：所述用于进行试验测试使用的引物序列分别为5'-TCGTATTGGGCGCCTGGTCAC-'3（SEQ ID NO：1），5'-TGGCAGTGATGGCA TGGACTG-'3（SEQ ID NO：2），所述用于试验测试的上下游引物使用浓度为10-30pmol，优选上下游引物使用浓度为20pmol，扩增片段长度为600bp。
7.如权利要求1所述的一种进行全血基因组快速扩增的方法，其特征在于：所述PCR扩增酶混合液包括热启动Taq酶、GP32蛋白；其中热启动Taq酶的用量为3-8U/人份，GP32蛋白的用量为0.05-0.2U/人份。
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