[发明专利]一种制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗的方法

权利要求书

1.一种制备F基因型腮腺炎减毒活疫苗的方法，其特征在于，将腮腺炎减毒毒株MHM-19接种到培养至单层的人胚肺二倍体细胞MHL-3中，待病毒增殖高峰期，冻融细胞释放病毒，离心去除细胞碎片，向离心后的病毒悬液中加入保护剂，制成F基因型腮腺炎减毒活疫苗半成品，将半成品进行冷冻干燥，即得F基因型腮腺炎减毒活疫苗成品；

其中，保护剂配方为：右旋糖酐6%、蔗糖15%、海藻糖9%、精氨酸0.3%、尿素1.5%、人白蛋白1%和谷氨酸钠1.5%，以PBS缓冲液配制。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）在细胞瓶内培养人胚肺二倍体细胞MHL-3至细胞长成单层，用0.25%胰蛋白酶溶液消化成单个细胞，去除细胞瓶内的胰蛋白酶溶液，加入MEM细胞培养液稀释至10⁵个细胞/mL，然后接种于CELL FACTORIES或CELL STACK，置于37℃培养；

2）待MHL-3细胞长成单层弃去培养液，用Earl’s液清洗细胞表面；

3）按MOI=0.1接种F基因型腮腺炎减毒毒株MHM-19的病毒悬液，加入MEM维持液置于33℃培养；

4）培养48h后，弃去维持液，用Earl’s液清洗细胞表面，加入MEM维持液置于33℃培养；

5）待MHL-3细胞完全病变，冻融三次，释放病毒，制成腮腺炎病毒悬液，4000rpm/min、4℃离心，去除细胞碎片；向离心后的病毒悬液中加入保护剂，制成F基因型腮腺炎减毒活疫苗半成品；

6）将半成品分装并进行冷冻干燥，制成F基因型腮腺炎减毒活疫苗成品。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1）中所述MEM培养液中含有0.03%谷氨酰胺、0.08%碳酸氢钠和10%小牛血清，以水配制；步骤3）和4）中所述MEM维持液中含有0.08%碳酸氢钠、0.03%谷氨酰胺和2%小牛血清，以水配制。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤5）中病毒悬液与保护剂按2:1的体积比混合。

5.根据权利要求1-4任一项所述方法制备的F基因型腮腺炎减毒活疫苗。

6.权利要求5所述F基因型腮腺炎减毒活疫苗在制备用于预防腮腺炎的药物中的应用。

7.一种疫苗冻干保护剂，其特征在于，所述保护剂的配方为：右旋糖酐6%、蔗糖15%、海藻糖9%、精氨酸0.3%、尿素1.5%、人白蛋白1%和谷氨酸钠1.5%，以PBS缓冲液配制。