[发明专利]凝血因子VII多肽

说明书

技术领域

本发明涉及具有促凝活性的经修饰的凝血因子VII (因子VII)多肽。它还涉及编码此类多肽的多核苷酸构建体、包含且表达此类多核苷酸的载体和宿主细胞、包含此类多肽的药物组合物、以及此类多肽的用途和治疗方法。

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SEQ ID NO: 1：野生型人凝血因子VII。

发明背景

对血管的损伤活化止血系统，其涉及细胞和分子组分之间的复杂相互作用。最终引起出血停止的过程称为止血。止血的重要部分是在损伤部位处的血液凝固和凝块形成。凝血过程高度依赖几种蛋白质分子的功能。这些称为凝血因子。凝血因子中的一些是可以以失活酶原或酶促活性形式存在的蛋白酶。通过由另一种蛋白酶解活性凝血因子催化的多肽链的特异性切割，酶原形式可以转换为其酶促活性形式。因子VII是在肝中合成且作为单链糖蛋白分泌到血液内的维生素K依赖性血浆蛋白质。通过在单个位点处即在SEQ ID NO: 1的R152和I153之间的特异性蛋白酶解切割，因子VII酶原转换为活性形式(因子VIIa)，产生由单个二硫键连接的双链分子。因子VIIa中的两条多肽链被称为轻和重链，分别对应于SEQ ID NO: 1(野生型人凝血因子VII)的残基1-152和153-406。因子VII占优势地作为酶原循环，但较少部分采取活化形式(因子VIIa)。

血液凝固过程可以分成三个时期：初始、扩大和传播。初始和传播期促使凝血酶形成，所述凝血酶是在止血中具有许多重要功能的凝血因子。如果排列在血管内表面的内皮细胞的单层屏障发生受损，则凝血级联起始。这暴露出血液中的血小板将与之粘附的内皮下细胞和血管外基质蛋白质。如果这发生，则存在于内皮下细胞表面上的组织因子(TF)变得暴露于在血液中循环的因子VIIa。TF是膜结合蛋白质，并且充当因子VIIa的受体。因子VIIa是具有固有的低活性的酶，即丝氨酸蛋白酶。然而，当因子VIIa与TF结合时，它的活性极大增加。因子VIIa与TF相互作用也将因子VIIa定位于具有TF的细胞的磷脂表面上，并且将其最佳放置用于将因子X活化为Xa。当这发生时，因子Xa可以与因子Va组合，以在具有TF的细胞的表面上形成所谓的“凝血酶原酶”复合物。凝血酶原酶复合物随后通过切割凝血酶原而生成凝血酶。通过使TF暴露于循环因子VIIa而活化且导致凝血酶的初始生成的途径称为TF途径。TF:因子VIIa复合物也催化因子IX至因子IXa的活化。随后活化因子IXa可以扩散至血小板表面，所述血小板粘附至损伤部位且已活化。这允许因子IXa与FVIIIa组合，以在活化血小板的表面上形成“tenase”复合物。由于其在将因子X活化为Xa中的显著效率，该复合物在传播期中起关键作用。有效的tenase催化的因子Xa活性的产生，进而又导致由凝血酶原酶复合物催化的凝血酶原至凝血酶的有效切割。

如果在因子IX或因子VIII中存在任何缺陷，则它损害重要的tenase活性，并且降低凝血所需的凝血酶产生。最初由TF途径形成的凝血酶充当促凝信号，其鼓励血小板在损伤部位处的召募、活化和聚集。这导致松散的原始血小板塞的形成。然而，该原始血小板塞是不稳定的且需要强化以支持止血。塞的稳定涉及将血小板锚定且纠缠在纤维蛋白纤维网中。

坚固且稳定的凝块的形成依赖于产生局部凝血酶活性的强爆发。因此，在血管损伤后导致凝血酶生成的过程中的缺陷可以导致出血障碍，例如A和B型血友病。具有A和B型血友病的人分别缺乏功能因子VIIIa或因子IXa。在传播期中的凝血酶生成严重依赖tenase活性，即需要因子VIIIa和FIXa两者。因此，在具有A或B型血友病的人中，无法进行原始血小板塞的适当固结，且持续出血。

替补疗法是用于A和B型血友病的传统治疗，并且涉及因子VIII或因子IX的静脉内施用。然而，在许多情况下，患者产生针对输注蛋白质的抗体(也称为抑制剂)，这降低或取消治疗的功效。重组因子VIIa (Novoseven?)已被批准用于治疗具有抑制剂的A或B型血友病患者，并且还用于终止出血发作或预防与创伤和/或手术相关的出血。重组因子VIIa也已被批准用于治疗具有先天性因子VII缺陷的患者。已提出重组FVIIa通过不依赖TF的机制运转。根据该模型，重组FVIIa由于其Gla结构域导向活化血液血小板的表面，在此处，它随后将因子X蛋白酶解活化为Xa，因此绕过功能性tenase复合物的需要。在不存在TF的情况下，FVIIa的低酶促活性以及Gla结构域对于膜的低亲和力可以解释实现具有血友病的人中的止血所需的超生理学水平的循环FVIIa的需要。