[发明专利]用于纯化转基因因子VII的方法

权利要求书

1.一种纯化转基因非人动物的乳中产生的转基因人因子VII(TgFVII)和/或转基因活化人因子VII(TgFVIIa)的方法，包括以下顺序的步骤：

(a)亲和色谱的步骤，该亲和色谱包括步骤：

(i)在允许人TgFVII和/或人TgFVIIa结合配体的条件下，使含有人TgFVII和/或人TgFVIIa的乳接触对人TgFVII和/或人TgFVIIa特异的配体，其中所述配体是针对至少一种人TgFVII或人TgFVIIa表位的抗原结合蛋白质，其缺乏轻多肽链，且其中所述配体包括形成两个完整的抗原结合位点的两条重多肽链，和其中所述配体源自骆驼科的免疫球蛋白重链，和

(ii)通过以非破坏性的方式打断与所述配体的相互作用，回收人TgFVII和/或人TgFVIIa，

(b)在人TgFVII和/或人TgFVIIa被保留在离子交换剂上的条件下，在离子交换剂上对洗脱的人TgFVII和/或人TgFVIIa色谱纯化，

(c)在人TgFVII和/或人TgFVIIa被保留在伪亲和树脂上的条件下，在伪亲和树脂上对洗脱的人TgFVII和/或人TgFVIIa色谱分离，和

(d)在尺寸排阻支持物上对洗脱的人TgFVII和/或人TgFVIIa色谱分离。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(ii)包括至少一个洗涤步骤，用于在从配体洗脱人TgFVII或人TgFVIIa之前除去未结合的材料，并且进一步任选地包括用于除去弱结合的材料的第二洗涤步骤。

3.根据权利要求1的方法，其中所述动物是雌性哺乳动物。

4.根据权利要求3的方法，其中所述动物是雌兔。

5.根据权利要求1的方法，还包括在步骤(a)之前的收集并澄清乳的预备步骤。

6.根据权利要求5的方法，其中通过加入柠檬酸盐，然后过滤来执行乳澄清步骤。

7.根据权利要求1的方法，其中步骤(b)的离子交换剂是阴离子交换剂。

8.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)的伪亲和树脂是羟磷灰石。

9.根据权利要求5的方法，还包括至少一个消除和/或灭活病毒的步骤，其中消除病毒的步骤是对来自权利要求1中的任一色谱步骤的洗脱液实施的，且其中灭活病毒的步骤是对澄清的乳实施的。

10.根据权利要求9的方法，其中消除病毒的步骤是在亲和色谱的步骤后实施的。

11.根据权利要求9的方法，其中消除和/或灭活病毒的至少一个步骤是通过纳米过滤和/或通过溶剂和/或去污剂处理实施的。

12.根据权利要求1的方法，还包括配制、杀菌和冻干经纯化的人TgFVII和/或人TgFVIIa的最终步骤。

13.根据权利要求1的方法，其中亲和色谱的步骤包括步骤：

(i)在使配体结合人TgFVII和/或人TgFVIIa的条件下，用来自含有重组产生的人TgFVII和/或人TgFVIIa的转基因雌兔的乳装载固定有如权利要求1中所定义的配体的色谱树脂；

(ii1)洗涤未结合的材料；

(ii2)洗涤弱结合的材料；和

(ii3)从树脂洗脱人TgFVII和/或人TgFVIIa。

14.根据权利要求2的方法，其中，在所述亲和色谱步骤期间，所述用于除去弱结合的材料的第二洗涤步骤用含有10％至50％的疏水剂的缓冲液执行，并且其离子强度是从200至600mM的范围。