[发明专利]用于FLOURY(FL2)性状基因渗入的玉米中的FLOURY 2基因特异性测定法

权利要求书

1.一种使用玉米植物组织测定等位基因的接合性和/或存在/缺乏的方法，该方法包括：

从所述玉米植物组织获得分离的基因组DNA的样品；

使所述分离的基因组DNA与多个核酸分子接触，所述多个核酸分子包含能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:9杂交的SEQ ID NO:7，能够在高严格条件下与SEQ ID NO:10杂交的核苷酸序列SEQ ID NO:6，以及包含SEQ ID NO:8的共同反向引物序列，其能够在高严格条件下与SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10两者杂交；并

使用所述多个核酸分子，通过竞争等位基因特异性PCR测定法测定所述分离的基因组DNA中fl2突变的接合性。

2.权利要求1的方法，其进一步包括：

使所述分离的基因组DNA与两个各包含能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:9杂交的核苷酸序列的核酸分子，和两个能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:10杂交的核酸分子接触；

扩增所述分离的基因组DNA的与两个核酸分子杂交的核苷酸序列之间的所述分离的基因组DNA的核苷酸序列，所述两个核酸分子各包含能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:9杂交的核苷酸序列；

扩增所述分离的基因组DNA的与两个核酸分子杂交的核苷酸序列之间的所述分离的基因组DNA的核苷酸序列，所述两个核酸分子各包含能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:10杂交的核苷酸序列；

在扩增反应中包含至少一个包含能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:9杂交的核苷酸序列且用第一报告物标记的核酸分子，和至少一个能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:10杂交且用第二报告物标记的核酸分子；并

检测所述第一和第二报告物的水平。

3.权利要求2的方法，其中所述第一报告物和所述第二报告物是具有可区别的激发/发射光谱的荧光染料。

4.权利要求3的方法，其中所述第一报告物是FAM，且所述第二报告物是VIC。

5.权利要求1的方法，其中至少一种能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:9杂交的所述核酸分子用第一荧光染料标记，且至少一种能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:10杂交的所述核酸分子用具有可区别的激发/发射光谱的第二荧光染料标记。

6.权利要求5的方法，其中所述第一荧光染料是FAM，且所述第二荧光染料是VIC。

7.权利要求1的方法，其中所述fl2突变包含核苷酸位置495处的SNP(C/T)。

8.一种用于将高赖氨酸含量的性状可靠且可预测地基因渗入植物种质中的方法，所述方法包括：

将具有fl2突变的植物与另一个植物杂交，其中所述fl2突变包含核苷酸位置495处的SNP(C/T)并且其中位置495处的核苷酸是T；

从通过所述杂交生成的后代植物获得分离的基因组DNA的样品；

使所述分离的基因组DNA与多个核酸分子接触，所述多个核酸分子包含能够在高严格性条件下与SEQ ID NO:9杂交的SEQ ID NO:7，能够在高严格条件下与SEQ ID NO:10杂交的核苷酸序列SEQ ID NO:6，以及包含SEQ ID NO:8的共同反向引物序列，其能够在高严格条件下与SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10两者杂交；

使用所述多个核酸分子，通过竞争等位基因特异性PCR测定法检测所述fl2突变；并

从所述杂交选择对于所述fl2突变纯合的后代，由此生成遗传工程化植物，其中高赖氨酸含量的性状已经基因渗入所述遗传工程化植物的种质中。