[发明专利]多重蛋白质定量标准物

说明书

相关专利申请的交叉引用

本申请要求2012年6月28日提交的美国临时专利申请第61/665,425号的优先权，其通过引用全文纳入本文。

技术领域

本发明属于蛋白质检测领域，具体涉及对凝胶电泳中的蛋白质定量。

背景

凝胶电泳，包括聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)，是用于评估蛋白质或多肽的分子量的常见实验室技术。凝胶电泳用于分离蛋白质，所述分离基于它们的电荷、大小和/或分子量。在非变性条件下，蛋白质可基于其荷质比分离，并且电泳迁移率受天然蛋白质的大小和形状影响。在变性条件下，例如存在阴离子去污剂例如十二烷基磺酸钠(SDS)，蛋白质会基于其分子量分离。阴离子去污剂会使蛋白质解折叠并提供均匀的负电荷密度，从而蛋白质的电泳迁移率是分子量的对数的线性函数。

对样品中蛋白质的量定量的方法为本领域已知，包括Bradford试验。Bradford试验依赖由已知蛋白质标准物生成的标准曲线来测定未知蛋白质的总量。然而，Bradford试验通常使用含有感兴趣蛋白质的溶液进行。若感兴趣蛋白质的消光系数已知，可使用分光光度法测量纯化的蛋白质的量。蛋白质的量还可通过偶联同位素标记方法(如ICAT、iTRAQ和串联治疗标签)的质谱来测定。然而，分光光度法受限用于溶液中纯蛋白质的测量。当前用于对SDS-PAGE凝胶中蛋白质定量的方法涉及从已知质量的纯化蛋白质的系列稀释液生成标准曲线，其中使各稀释液在凝胶的分开泳道中与含感兴趣靶蛋白的样品平行电泳。

本发明公开了用于对电泳凝胶中蛋白质的量定量的蛋白质定量标准物，以及测定凝胶中蛋白质的量的方法，而无需生成已知蛋白质质量的系列稀释或制备感兴趣蛋白质的纯化样品。

发明内容

本发明描述了蛋白质定量标准物，其可用于测定电泳凝胶中靶蛋白的质量(即含量或量)。所述标准物包含可用于生成质量标准曲线的未染色多肽组，用于测定所述凝胶中靶多肽的量。所述未染色多肽组可在混合物中提供，所述混合物适于加样和在凝胶的一个泳道中电泳分离。所述蛋白质定量标准物还可包括预染色多肽组，其可用作测定靶多肽分子量(即大小)的分子量梯度。因此，在一些实施方式中，所述蛋白质定量标准物可用于测定电泳凝胶中靶蛋白的分子量和质量。所述预染色多肽组和未染色多肽组可在混合物中提供，所述混合物适于加样和在凝胶的一个泳道中电泳分离。在电泳分离时，所述预染色多肽显示为凝胶上的条带，使得使用者可确定不同大小多肽之间的分离程度。靶蛋白通常在凝胶的另一泳道中加样，随后电泳分离。

因此，在一个方面，提供一种可加样到电泳凝胶的一条泳道中的蛋白质定量标准物，所述标准物包括未染色多肽组，其中所述未染色多肽组的成员具有不同的电泳迁移率并且以不同量存在，从而所述标准物适于从凝胶的一条泳道中生成蛋白质质量标准曲线。在一个实施方式中，所述未染色多肽组的不同成员具有不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一个实施方式中，所述未染色多肽组的各成员具有与所述未染色多肽组的其他成员不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。

在一些实施方式中，所述蛋白质定量标准物还包含具有不同分子量和/或不同电泳迁移率的预染色多肽组，从而所述标准物适于在凝胶的一条泳道中生成分子量梯度和蛋白质质量标准。在一个实施方式中，所述预染色多肽组的不同成员具有不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一个实施方式中，所述预染色多肽组的各成员具有与所述预染色多肽组的其他成员不同的分子量和/或不同的电泳迁移率。在一些实施方式中，所述标准物的至少一种预染色多肽和至少一种未染色多肽具有不同电泳迁移率。

在一些实施方式中，所述蛋白质定量标准物在共同混合物中包含具有不同分子量的预染色多肽组和具有不同分子量的未染色多肽组，其中所述未染色多肽组的成员具有不同电泳迁移率且以不同的量存在，从而所述标准物适于在电泳凝胶的一条泳道中生成分子量梯度和蛋白质质量标准。所述蛋白质质量标准可用于从凝胶的一条泳道生成蛋白质定量标准曲线。