[发明专利]多重蛋白质定量标准物有效
| 申请号: | 201380034817.4 | 申请日: | 2013-06-28 |
| 公开(公告)号: | CN104471395B | 公开(公告)日: | 2017-05-03 |
| 发明(设计)人: | J·S·西诺;D·C·伊;L·O·洛马斯 | 申请(专利权)人: | 生物辐射实验室股份有限公司 |
| 主分类号: | G01N33/53 | 分类号: | G01N33/53;G01N33/58;G01N33/00 |
| 代理公司: | 上海专利商标事务所有限公司31100 | 代理人: | 陶家蓉 |
| 地址: | 美国加利*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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| 摘要: | |||
| 搜索关键词: | 多重 蛋白质 定量 标准 | ||
1.一种可在电泳凝胶的一条泳道中上样的蛋白质定量标准物,其特征在于,所述标准物包括(i)和(ii)的混合物:
(i)未染色多肽组,其中所述未染色多肽组的成员具有不同的电泳迁移率并且以不同量存在,其中所述未染色多肽是未标记多肽,和
(ii)具有不同电泳迁移率的预染色多肽组,
从而所述标准物适于从凝胶的一条泳道中生成蛋白质质量标准曲线和分子量梯度。
2.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中所述多肽大小范围为2kDa-250kDa。
3.如权利要求2所述的蛋白质定量标准物,其中所述多肽大小范围为2kDa-100kDa。
4.如权利要求2所述的蛋白质定量标准物,其中所述多肽大小范围为20kDa-100kDa。
5.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中所述预染色多肽组的成员具有不同电泳迁移率。
6.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中所述预染色多肽组的成员以相同的量存在。
7.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中至少一种预染色多肽和至少一种未染色多肽具有不同的电泳迁移率。
8.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中所述未染色多肽包含百分比差异不多于5%的色氨酸。
9.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中所述预染色多肽用一种或多种有色染料染色,其中所述一种或多种有色染料包含单一有色染料、不同有色染料的组合或荧光染料。
10.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,还包括氨基酸序列与预染色多肽相同的未染色多肽。
11.一种试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包含如权利要求1所述的蛋白质定量标准物。
12.确定靶多肽的质量的方法,其特征在于,所述方法包括:
使所述靶多肽在凝胶的一条泳道中电泳迁移,并使权利要求1所述的蛋白质定量标准物在所述凝胶的另一泳道中电泳迁移;
检测所述靶多肽和所述蛋白定量标准物;
将所述靶多肽的检测量与由所述蛋白质定量标准物生成的质量标准曲线做比较,从而确定所述靶多肽的质量。
13.如权利要求12所述的方法,还包括检测蛋白质标准物的预染色多肽条带以确定所述靶多肽的表观分子量。
14.如权利要求12或13所述的方法,其中所述检测包括无染剂成像。
15.如权利要求12或13所述的方法,其中所述检测包括荧光成像。
16.如权利要求12所述的方法,其中所述检测包括使所述未染色多肽与染剂或染料接触并观察所述多肽。
17.如权利要求12所述的方法,其中所述凝胶是变性凝胶或非变性凝胶。
18.测定靶多肽的质量的方法,其特征在于,所述方法包括:
使所述靶多肽和权利要求1所述的蛋白质定量标准物在微流体装置中电泳迁移;
检测所述靶多肽和所述蛋白定量标准物;
将所述靶多肽的检测量与由所述蛋白质定量标准物生成的质量标准曲线做比较,从而确定所述靶多肽的质量。
19.确定凝胶或凝胶成像中靶多肽的质量的计算机执行方法,其特征在于,所述方法包括:
在用可执行指令配置的一种或多种计算机系统控制下;
对权利要求1所述的蛋白质定量标准物中的未染色多肽进行定量的定量步骤;
基于所述定量步骤生成回归拟合;
从所述回归拟合计算所述靶多肽的质量;和
提供所述经计算的质量。
20.如权利要求19所述的计算机执行方法,其中所述回归拟合是线性回归。
21.如权利要求19所述的计算机执行方法,其中所述回归拟合是非线性回归。
22.如权利要求1所述的蛋白质定量标准物,其中所述标准物的预染色多肽具有不同分子量和不同质量,从而当在凝胶中分离时,一种或多种所述预染色多肽看起来在所述凝胶的一个或多个条带中具有不同含量的蛋白质。
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