[发明专利]电泳用器具、电泳装置、样本导入方法以及样本分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及能够理想地适用于生命科学技术中的生物体样本的二维电泳的电泳用器具、电泳装置、样本导入方法以及样本分离方法。

背景技术

二维电泳一般分辨率较高，因而作为蛋白质等生物体样本的分离方法，是一种优秀的方法。在利用二维电泳分离蛋白质的情况下，利用等电点电泳来进行向一维方向的分离。等电点电泳是对凝胶施加电压，利用蛋白质的等电点的不同来进行分离的方法。另外，在向二维方向的分离中，广泛利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，该SDS-PAGE使用作为阴离子系界面活性剂的十二烷基硫酸钠(SDS)。二维电泳能够一次分离很多蛋白质，进行全面分析，因此在蛋白质组分析中得到广泛利用。

等电点电泳的现有技术有两种方法，第一种方法是用包含生物体样本的溶胀液使干胶条凝胶溶胀，移动到凝胶胶条容器中进行等电点电泳，第二种方法是预先仅用溶胀液使干胶条凝胶溶胀，移动到凝胶胶条容器之后，在样品杯中加入生物体样本以进行等电点电泳。后者称为杯上样(cup loading)法，由于在施加电压的同时进行生物体样本的导入，所以生物体样本的导入效率良好，由于能够从某个区域(酸侧或碱侧)导入生物体样本，所以移动距离较长，提高了分辨率，因此这种方法用于临床样本的二维电泳等(参考专利文献1)。

一般而言，利用上述杯上样法的等电点电泳首先在专用腔室中加入包含尿素、硫脲、3-[3-(胆酰胺丙基)二甲氨基]丙磺酸内盐(CHAPS)、二硫苏糖醇(DTT)、载体两性电解质(carrier ampholyte)的水溶液，浸泡对聚丙烯酰胺凝胶进行了pH梯度固定化和干燥得到的干胶条凝胶(IPG凝胶)，浸泡时凝胶面朝下。为了防止干燥，加入石蜡油等覆盖溶液，静置数小时以溶胀(再水化)上述IPG凝胶。

接着，从上述腔室中取出IPG凝胶，凝胶面朝上地设置到等电点电泳用的腔室中，并在IPG凝胶的上方设置湿滤纸和电极。随后，在凝胶上的任意位置处设置样品杯，在样品杯内添加包含生物体样本的样本溶液，加入上述覆盖油。在无样品杯区域的凝胶上也加入覆盖油，从而使凝胶不会暴露在空气中，施加电压以开始等电点电泳。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本公开专利公报“特表2008-510481号公报(2008年4月10日公开)”

发明内容

发明要解决的课题

在利用上述杯上样法的等电点电泳中，在IPG凝胶的溶胀工序中，在尺寸不稳定的IPG凝胶的上方即使滴下溶胀液，也不会均匀地进行溶胀，因此一般使凝胶面朝下。另外，在施加电压的工序中，需要在生物体样本上添加覆盖溶液，因而需要使凝胶面朝上。此外，IPG凝胶不处于溶胀的状态时，无法不留间隙地设置样品杯。根据上述理由，需要在IPG凝胶溶胀之后移动IPG凝胶。

另外，如上所述，凝胶包含较多生物体样本和水分，需要用于防止该凝胶的干燥的覆盖溶液(一般是石蜡油等)，此外，样品杯内的生物体样本以高浓度存在，因此通常在样品杯与凝胶之间插入用于除去沉淀的不纯物质的过滤器(滤纸等)。这种覆盖溶液、样品杯、过滤器等的设置工作要求使用者较为熟练，对研究者的电泳分离图形的再现性产生影响。

在这种背景下，需要一种能够再现性较好地、容易地进行基于等电点电泳的生物体样本分离的方法。

本发明的目的在于提供一种电泳用器具、电泳装置、样本导入方法以及样本分离方法，能够再现性较好地、容易地进行基于等电点电泳的生物体样本分离。

用于解决课题的手段

本发明的一技术方案的电泳用器具具备电泳用腔室，所述电泳用腔室具有：设置通过电泳来分离生物体样本的样本分离介质的设置面；以及与所述样本分离介质的两端部连接的第一电极和第二电极，在所述电泳用腔室的所述设置面上，设置有用于注入包含所述生物体样本的样本溶液的凹坑。

本发明的一技术方案的样本导入方法，在通过电泳来分离生物体样本的样本分离介质中导入所述生物体样本，包括：第一步骤，对电泳用腔室的样本保持部供给包含所述生物体样本的样本溶液，所述电泳用腔室具有：设置所述样本分离介质的设置面、以及与所述样本分离介质的两端部连接的第一电极和第二电极，所述样本保持部设置在所述设置面上，所述样本保持部抑制所述样本溶液的扩大润湿的同时保持所述样本溶液；以及第二步骤，使所述样本分离介质接触对所述样本保持部供给了的所述样本溶液，在所述样本分离介质中导入所述生物体样本。

发明效果