[发明专利]生产D-乳酸的新型菌株及其用途

权利要求书

1.D-乳酸生产菌株，其被修饰以使L-乳酸脱氢酶(L-LDH)活性减弱或失活并使D-乳酸脱氢酶(D-LDH)活性增强。

2.根据权利要求1所述的菌株，其中L-LDH编码多核苷酸被失活。

3.根据权利要求2所述的菌株，其中所述L-LDH编码多核苷酸选自副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)的ldh(SEQ ID NO:25)和ldh1(SEQ ID NO:26)、副干酪乳杆菌的ldh1(SEQ ID NO:27)和ldh2(SEQ ID NO:28)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)的ldh(LGG_02523)(SEQ ID NO:29)和ldh(LGG_00606)(SEQ ID NO:30)。

4.根据权利要求1所述的菌株，其中D-LDH编码多核苷酸被引入。

5.根据权利要求4所述的菌株，其中所述D-LDH编码多核苷酸来自植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)或德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)。

6.根据权利要求5所述的菌株，其中所述D-LDH编码多核苷酸是编码德氏乳杆菌的LDHA(SEQ ID NO:31)的多核苷酸或者编码植物乳杆菌的LDHD(SEQ ID NO:32)的多核苷酸。

7.根据权利要求1所述的菌株，其中一个或多个异源D-LDH编码多核苷酸在染色体中取代L-LDH编码多核苷酸并且过量表达。

8.根据权利要求1所述的菌株，其中在修饰之前的所述菌株为生产L-乳酸的菌株。

9.根据权利要求8所述的菌株，其中所述菌株是乳杆菌(Lactobacillus sp)菌株。

10.根据权利要求8所述的菌株，其中编码干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的LDH1的多核苷酸(SEQ ID NO:27)和编码干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)的LDH2的多核苷酸(SEQ ID NO:28)分别用编码德氏乳杆菌的LDHA(SEQ ID NO:31)的多核苷酸和编码植物乳杆菌的LDHD(SEQ ID NO:32)的多核苷酸取代。

11.根据权利要求8所述的菌株，其中编码副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)的LDH的多核苷酸(SEQ ID NO:25)和编码副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)的LDH1的多核苷酸(SEQ ID NO:26)分别用编码德氏乳杆菌的LDHA(SEQ ID NO:31)的多核苷酸和编码植物乳杆菌的LDHD(SEQ ID NO:32)的多核苷酸取代。

12.根据权利要求8所述的菌株，其中编码鼠李糖乳杆菌的LDH(LGG_02523)的多核苷酸(SEQ ID NO:29)和编码鼠李糖乳杆菌的LDH(LGG_00606)的多核苷酸(SEQ ID NO:30)分别用编码德氏乳杆菌的LDHA(SEQ ID NO:31)的多核苷酸和编码植物乳杆菌的LDHD(SEQ ID NO:32)的多核苷酸取代。

13.根据权利要求12所述的菌株，其中其是保藏号为KCCM11273P的副干酪乳杆菌CC02-0095。

14.制备修饰的D-乳酸生产菌株的方法，包括：

(a)在L-乳酸生产菌株中使L-乳酸脱氢酶(L-LDH)活性减弱或失活，以获得修饰的乳酸生产菌株；和

(b)在所述修饰的乳酸生产菌株中使D-乳酸脱氢酶(D-LDH)活性引入或增强。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述L-乳酸生产菌株是乳杆菌(Lactobacillus sp)菌株。