[发明专利]用于检测和鉴定MREJ型xxi的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的序列有效
申请号: | 201380029724.2 | 申请日: | 2013-03-14 |
公开(公告)号: | CN104364395B | 公开(公告)日: | 2018-03-23 |
发明(设计)人: | C·梅纳德;C·罗杰-达勒姆波特 | 申请(专利权)人: | 基因欧姆科技加拿大公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C07H21/04;C12N15/31 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司11245 | 代理人: | 赵蓉民,陆惠中 |
地址: | 加拿大,*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 检测 鉴定 mrej xxi 耐甲氧 西林 金黄色 葡萄球菌 mrsa 序列 | ||
1.第一扩增引物和第二扩增引物在制备用于检测包括MREJ型xxi核酸的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的试剂盒或组合物中的应用,所述金黄色葡萄球菌包括包含mecA同系物基因mecALGA251的葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)元件,所述SCCmec盒被插入金黄色葡萄球菌染色体DNA,从而产生包括SEQ ID NO:1的核苷酸149-774的多态性右侧末端连接(MREJ)型xxi序列,所述多态性右侧末端连接(MREJ)型xxi序列包括多态性右侧末端序列和靠近所述多态性右侧末端序列的染色体DNA,其中所述试剂盒或组合物包括:
第一扩增引物,所述第一扩增引物长度在10和45个核苷酸之间,其中所述第一扩增引物在标准PCR条件下与所述包括SEQ ID NO:1的核苷酸149-774的MREJ型xxi序列的多态性右侧末端序列特异地杂交,和
长度在10和45个核苷酸之间的第二扩增引物,其中所述第二扩增引物在标准PCR条件下与金黄色葡萄球菌的orfX基因杂交,并且其中所述第一和第二扩增引物一起在所述标准PCR条件下在存在包括MREJ型xxi核酸的MRSA的情况下产生对MREJ型xxi核酸的右侧末端连接特异的扩增子。
2.权利要求1所述的应用,其中所述试剂盒或组合物进一步包括一种或多种另外的扩增引物,其中所述一种或多种另外的扩增引物长度在10和45个核苷酸之间,并且其中所述一种或多种另外的扩增引物与来自MREJ型i至xx MRSA的一种或多种多态性SCCmec右侧末端序列特异地杂交。
3.权利要求1所述的应用,其中所述试剂盒或组合物进一步包括一种或多种另外的扩增引物对,其中所述一种或多种另外的扩增引物对在所述标准PCR条件下与nuc序列特异地杂交并能产生nuc序列的扩增子。
4.权利要求1所述的应用,其中所述试剂盒或组合物被用于进行多重PCR。
5.权利要求1所述的应用,其中所述试剂盒或组合物被用于进行实时PCR。
6.权利要求1所述的应用,其中所述试剂盒或组合物进一步包括一种或多种另外的扩增引物对,其中所述一种或多种另外的扩增引物对在所述标准PCR条件下与mecA和/或mecC序列特异地杂交并能产生mecA和/或mecC序列的扩增子。
7.权利要求1所述的应用,其中所述试剂盒或组合物进一步包括探针,其中所述探针与所述MREJ型xxi核酸的扩增子在所述标准PCR条件下特异地杂交。
8.权利要求6所述的应用,其中所述试剂盒或组合物包括引物对,所述引物对特异地与SEQ ID NO:156杂交,并能扩增SEQ ID NO:156中的mecA序列。
9.权利要求6所述的应用,其中所述试剂盒或组合物包括引物对,所述引物对特异地与SEQ ID NO:157杂交,并能扩增SEQ ID NO:157中的mecC序列。
10.权利要求3所述的应用,其中所述试剂盒或组合物包括引物对,所述引物对特异地与SEQ ID NO:158杂交,并能扩增SEQ ID NO:158中的nuc序列。
11.权利要求2所述的应用,其中来自MREJ型i至xx MRSA的所述一种或多种多态性SCCmec右侧末端序列选自SEQ ID NOs:5至29。
12.权利要求1所述的应用,其中所述第一扩增引物包括SEQ ID NO:2。
13.权利要求12所述的应用,其中所述第二扩增引物包括SEQ ID NO:3。
14.权利要求13所述的应用,其中所述试剂盒或组合物进一步包括探针,其中所述探针包括SEQ ID NO:4或82。
15.权利要求14所述的应用,其中所述探针包括荧光发射体部分和荧光猝灭剂部分。
16.权利要求1所述的应用,其中所述第一和第二扩增引物处于冻干的形式。
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