[发明专利]用于真核细胞的培养基

说明书

技术领域

本发明涉及用于培养真核、具体地动物细胞的培养基的生产，以及因此生产的细胞培养基，和其用于真核、具体地动物细胞的体外培养的的用途。

背景技术

通过培养哺乳动物、植物或昆虫细胞，有价值的生物化学品和生物医药品，例如抗体和抗生素的生产需要适当的培养基。已经用包含未定义的成分(如胎牛血清(FCS)，几种动物来源的蛋白质和/或牛来源的蛋白质水解产物)的一系列添加物补充细胞培养基成分。

在动物细胞培养中使用的血清或血清来源的物质，如白蛋白、转铁蛋白或胰岛素，可以包含可能污染培养物以及由这些所获得的生物医药产品的不需要的试剂。此外，像牛肉或胶原水解产物的牛来源蛋白产品承受BSE污染的风险。而且，必须对所有已知的病毒，包括可以通过血清传输的肝炎和HIV，测试来源于人类血清中的添加剂。

总之，通过未知的试剂可以污染所有血清衍生的产品。在细胞培养中，在血清或蛋白质添加剂来源于人类或其它动物来源的情况下，无数的问题(例如，不同批次的质量和组成变化，以及病毒、支原体或BSE污染的风险)可以发生。因此，植物蛋白质水解产物或植物蛋白胨普遍使用于应当不含动物组分的培养基。

然而，在没有动物来源的细胞培养添加剂的培养基中，动物细胞的生长和产率总是无法令人满意的。频繁地观察到，体外培养的动物细胞成团(in lump)生长。这被认为是欠佳的条件，因为剥夺了在团的核心的细胞的营养物，并且细胞将会死亡。在下游处理过程中，还存在堵塞管路或过滤器的风险。通过它们的外观也可以评估细胞下降的活力。具有下降的活力的细胞显示出不规则的形状，即不圆的外形，并且还具有不同于具有完全明亮的和透明的细胞内含物的健康细胞的“成粒”细胞内含物。

WO2006/123926涉及在至少一种植物蛋白来源(优选地，来自油菜、小麦或香菜)的基础上的一种用于生长和/或培养微生物和/或细胞的肽组合物。在实施例中介绍了小麦水解产物的效果。

WO2006/128764公开了用于培养生产复合蛋白质的哺乳动物细胞的方法，其中，向细胞培养物中进料一种或多种植物来源的蛋白胨。举例证明了植物来源大豆、棉籽和豌豆。在伴随实施例中显示了大豆水解产物对CHO细胞培养的影响。

WO2009/020389公开了向日葵属(向日葵)物质的蛋白质水解产物作为用于培养真核、具体地动物细胞的培养基组分的用途。

US2003/0203448A1描述了用于细胞培养的无蛋白质的和无血清的培养基，包含大豆水解产物和可选地添加的游离氨基酸。

US2002/0039787公开了用于在体外培养微血管内皮细胞的方法，所述方法包括，在存在有效量的人类血清下，培养微血管内皮细胞的富集群。

植物蛋白质水解产物的功能性是它的化学成分的直接结果。它受到如原料、加工因素、过程控制和储存条件的几个因素的影响。因此，它导致一种持久的仍很少研究的定义为“批次间偏差”的现象。

生物制药工业对其表示了重要的关注，其是这些水解产物的消费者，因为它可以意味着在产品收率上10％至25％的偏差以及它具有直接的财政后果。本发明旨在解决这些忧虑。

发明内容

已发现C₂-C₆α-羟基酸、这些酸的盐、这些酸的酯和它们的组合，结合选自以下各项的一种或多种化合物：由γ-谷氨酰基氨基酸、焦谷氨酰基氨基酸、包含谷氨酸或包含脯氨酸的二肽、氧代氨基酸、高氨基酸(homo-amino acid)、N-乙酰基氨基酸以及甘氨酰基-甘氨酸组成的氨基酸衍生物的组；酚酸衍生物；直链C₂-C₆或环状C₆糖醇；吡啶酸衍生物；以及选自尿嘧啶、腺嘌呤、3’-单磷酸腺苷(3’-AMP)以及5’-单磷酸腺苷(AMP)的核碱基和/或核苷酸，或者来自这些化合物组的化合物的组合，对真核细胞尤其是动物细胞体外细胞培养具有强的生长和生产促进效果。这些化合物的最低水平的存在致使一致的并且因此商业上有吸引力的产品性能。包含这些组分的培养基极其适用于培养真核、具体地动物细胞。因此本发明提供了一种包含这些特定组分的细胞培养基，以及生产这些培养基的方法和使用包含作为培养基组分的这些组分的组合物用于在体外培养动物细胞的方法。

具体实施方式